Triton X-100细胞裂解液

简介：

X-100细胞裂解液是一种经典的快速裂解细胞组织并获得蛋白的裂解液。所获PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100、NaCl、Tris-HCl等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的讲解，为维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用去污剂Triton X-100破坏脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。不宜用Bradford法测定由Triton X-100 Lysis Buffer获得样本的蛋白浓度。

保存条件： 

-20℃保存，一年有效

操作步骤(仅供参考)： 

一)贴壁培养细胞 

1、取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀，使PMSF终浓度为1mM。

2、去培养液，低速离心，弃上清。

3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解，通常裂解1～3s内，细胞就会被裂解。(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

4、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

二)悬浮培养细胞 

1、取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。 

2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。 

3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液比例，加入Triton X-100 Lysis Buffer。

4、4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 

5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

三)组织样本 

1、取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀后，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。    

2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。

3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。

4、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。 

5、步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充1～2min之内，以减少蛋白的降解。 

6、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

7、进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项：

1. 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。 

2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减 少裂解液的用量。

3、如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难 裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

1. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。

2. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。

3. 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。

7、本产品仅供科研使用，严禁它用。

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