RIPA裂解液（强）无抑制剂

简介：

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由 Tris 、NP-40、 sodium deoxycholate 等组成，不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

操作步骤(仅供参考)： 

(一)贴壁培养细胞 

1、取 Enhanced RIPA lysis buffer 室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。 

2、去除贴壁细胞的培养液，，低速离心，弃上清。

3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。

4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 

5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞 

1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制 

剂。 

2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。 

3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 裂解液的比例， 

加 入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。 

4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本 

1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。

3、按照每20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解。 

4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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