伊文思蓝染色液（0.5%）

        伊文思蓝染色液(0.5%)

简介：

伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，是一种非膜渗透性偶氮染料，与血浆白蛋白高度亲和，高度易燃。分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6。当质膜受损时，染料能进入细胞质和细胞核，从而将其染成蓝色，可用来检测细胞活力。伊文思蓝还能用来研究血脑屏障( BBB )渗透性，通过与白蛋白结合从而指示血脑屏障穿透蛋白能力。伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于组织切片染色，测定血脑屏障完整性、染色区分活细胞、测定血容量。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但是没有办法区分死亡与坏死。

BIOISCO 伊文思蓝染色液(0.5%)使用很方便，直接加入样本染色即可。主要用于组织切片染色，抗超敏递质实验，该产品仅用作科研实验，不可做他用。

组成：

保存条件：

4℃避光保存，一年有效。

操作步骤（仅供参考）：

(一)血脑屏障通透性

1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1 h后处死小鼠，取目的脑组织。

2、 脑组织置于1.5 ml 离心管中，加入1 ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心。

3、 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作：取上清，按上清：丙 酮=3：7比例加入丙酮，室温孵育24 h。

4、 离心15 min。

5、 取上述溶液，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。

(二)活细胞染色

1、 取100ul重悬细胞到常规离心管内，加入100ul Evans Blue Stain轻轻混匀染色(染色时间可适当延长，但不宜超过10 min)。

2、 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

1、 Evans Blue Stain对人体有轻微毒性，请小心防护。

2、 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3、 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4、 最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。