丙二醛（MDA）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S）

丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量试剂盒说明书 

分光光度法 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义： 

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中 包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。

测定原理：

MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在 532nm 有最大吸收峰，进行 比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 与 600nm 下的吸光度 的差值计算 MDA 的含量。

注意事项： 临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。

需自备仪器和用品：

可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

MDA 提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4个）： 提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或 细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰 上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提 取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：按照血清（浆）：提取液体积(ml)为 1：1 的比例，充分混合。8000g 4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。 

测定步骤：

1、吸取 0.5ml 试剂一于 2ml 离心管中，再加入 0.5ml 样本, 混匀。 

2、95℃水浴中保温 30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心 10min。 

3、吸取 1ml 上清液于 1ml 玻璃比色皿中，测定 532nm 和 600nm 处的吸光度，记为 A532 和 A600， ΔA= A532-A600。