黄嘌呤氧化酶（XOD）检测试剂盒（微量法 50T/48S）

黄嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 

测定意义： 

XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷 酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD 大量 释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。

测定原理：

XOD 催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。

需自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵、 冰和蒸馏水。 

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4个）： 提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或 细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰 上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提 取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。

2、 XOD 检测工作液的配制： OX004-50T/48S 用时在每瓶试剂二先加入 0.21ml 试剂三确保溶解混匀后，再加入试剂一定容至 7.5ml，充分混匀，现配现用。 OX004-100T/96S 用时在每瓶试剂二先加入 0.42ml 试剂三确保溶解混匀后，再加入试剂一定容至 15ml，充分混匀，现配现用。 3、 测定前将 XOD 检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。 

4、 准备 96 孔 UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长 小于 340nm 务必使用 UV 板）。

5、在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μl 样本和 200μl 工作液，立即混匀并计时，记录 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA＝A2-A1。