谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(微量法100T/96S)

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

GSH-Px 是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px 不仅能

够特异地催化还原型谷胱甘肽与 ROS 反应，生成氧化型谷胱甘肽 GSSG，从而保护生物膜免受 ROS 的损

害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加

机体抗辐射等能力。

测定原理：

GSH-Px 催化有机过氧化物氧化 GSH，产生 GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化 NADPH 还原 GSSG，

再生 GSH，同时 NADPH 氧化生成 NADP+；NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而 NADP+没有；通过测定

340 nm 光吸收减少速率来计算 GSH-Px 活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96 孔板、和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂

一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加

入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，

4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

GSH-Px 测定操作：

1. 酶标仪预热 30 min，调节波长到 340 nm。

2. 混合试剂在 25℃或者 37℃（哺乳动物）水浴中预热 30min。

3. 混合试剂配制：临用前，取试剂二一瓶，加入试剂一 10 mL，充分震荡溶解后，取少量、混合液于一

瓶试剂三中，充分混匀后再转移回试剂二中，混匀待用。（当天用完）

4. 试剂四的稀释：吸取 21.5μl 试剂四，加入 5ml 蒸馏水充分混匀，临用前配制，配制好的试剂当天使用。

5. 测定管：依次在 96 孔板中加入 20μl 上清液、160μl 预热的混合试剂、20μl 稀释后的试剂四，迅速混匀

后于 340nm 处测定第 30 s 和第 210s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2。△A 测定管= A1﹣A2。