DASPEI线粒体荧光探针的使用方法

简要介绍

DASPEI是一种苯乙烯染料，用于活细胞的线粒体染色。

DASPEI具有较大的荧光斯托克斯位移，用作膜电位探针时被摄取速度相对较慢。

体内外DASPEI可用来鉴定几种不同类型的表皮细胞，包括真骨鱼内的表皮电感受器、机械刺激感受器和氯细胞，以及两栖动物的机械刺激感受器。

DASPEI能用来标记斑马鱼幼虫的毛细胞。

物理性质

【英文名称】：2-[4-(Dimethylamino)styryl]-1-ethylpyridinium iodide

【CAS NO】：3785-01-1

【分子式】：C17H21IN2

【分子量】：380.27

【熔点】：267 °C

【状态】：橙色固体

【Ex/Em】：461/589nm

【溶解性】：溶于DMSO

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

使用方法

1.DASPEI 工作液的配制

（1）制备储存液

用 DMSO 配制 10 mM 的 DASPEI

注：DASPEI 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。

（2）工作液的配制

用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 5-10 μM 的 DASPEI 工作液。

注：请根据实际情况调整 DASPEI 工作液浓度，且现用现配。

2. 细胞染色 (悬浮细胞)

（1）离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。细胞密度在1×106/mL。

（2）加入 1 mL DASPEI 工作液，室温孵育 30-60 分钟。

（3）400 g，离心 3-4 分钟，弃去上清。

（4）加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。

（5）用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

3. 细胞染色 (贴壁细胞)

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。

（3）加入 100 μL 染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育30-60 分钟。

（4）吸去染料工作液，用培养基洗 2-3 次，每次 5 分钟，使用荧光显微镜进行观察。

注意事项

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

浓度控制可能存在影响，需尝试测试不同浓度；实验设计建议设置空白对照及膜电位干扰对照。