NCIH661人非小细胞肺癌细胞

细胞属性：

 细胞特性

种属来源:人

性别年龄:43岁，白人男性

组织来源:肺

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:RPMI1640 +10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3传代, 2-3天传1代

1. 核心生物学特性

分子病理特征

组织来源：源自大细胞肺癌患者原发灶，病理分型为 大细胞神经内分泌癌（LCNEC），兼具NSCLC与SCLC特征

驱动变异：

RB1缺失（全外显子缺失） + TP53 R248W突变（双等位失活）

独特标记：ASCL1（+）/NEUROD1（-）神经内分泌分化，但保留NSCLC形态

功能特性：

高表达PD-L1（TPS 40-60%）和CD47（"别吃我"信号）

分泌5-羟色胺（＞50ng/mL/10 cells）提示神经内分泌活性

2. 研究应用方向

转化医学价值

免疫治疗模型：

抗PD-1/抗CD47双抗联合治疗评估

与M2巨噬细胞共培养诱导T细胞耗竭表型

分子机制研究：

RB1缺失背景下细胞周期异常调控

神经内分泌-非内分泌转化（N-NE转换）动态追踪

技术适配性

单细胞多组学：已建立scRNA-seq+ATAC-seq联合分析流程

类器官培养：需添加10μM Y-27632 + 20ng/mL FGF2形成致密球体

3. 培养体系优化

定制化培养方案

基础培养基：

 DMEM/F12 (3:1) + 15% 特级FBS（需预筛选支持神经内分泌表型）

关键添加物：

- N2补充剂（1:100）

- 5-羟色胺受体拮抗剂（Ondansetron 1μM）

- 维生素D3（10nM，抑制异常分化）

特殊条件：

 传代时机械吹散（避免胰酶损伤表面标志物）

 建议使用poly-HEMA包被培养器皿防贴壁

4. 质控与问题解决

检测项  方法  标准  常见问题  解决方案

RB1缺失稳定性  WES+RNA-seq验证  缺失覆盖≥90%  表型漂移  磁珠分选ASCL1+亚群

支原体污染  PCR-电泳双验证  条带阴性  培养液浑浊  更换抗生素组合（如Plasmocin）

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