HT29人结肠癌细胞

HT29人结肠癌细胞

 基本特性:

种属来源:人

性别年龄:44 岁，白人女性

组织来源:皮肤

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25 或 1 mL 冻存管

培养条件:McCoy's 5a Medium Modified+10%fetal bovine serum+1%P/S

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3 传代, 2-3 天传 1 代

1. 细胞系基础特征：

组织来源

源自人 结肠腺癌（44岁女性患者原发灶），属 微卫星稳定型（MSS），是结直肠癌研究的经典模型。

分子特征

高频突变：

TP53突变（R273H热点突变）、PIK3CA激活突变（E545K/H1047R，占30-40%病例）。

KRAS野生型（区别于HCT116/SW480），β-catenin核积聚（APC通路异常）。

标志物表达：

阳性：CEA、CK20（肠上皮分化标志），CD44v6（肿瘤干细胞标记）。

阴性：MSI-H相关错配修复蛋白（MLH1/MSH2正常）。

培养特性

生长方式：贴壁生长，细胞呈立方状或柱状，可形成腺样结构，接触抑制部分保留。

分化潜能：在特定条件下（如丁酸钠处理）可诱导肠上皮分化（碱性磷酸酶活性升高）。

2. 核心科研应用：

靶向治疗研究

PI3K/mTOR通路抑制：测试阿培利司（PI3Kα抑制剂）联合依维莫司的协同效应。

Wnt/β-catenin靶向：评估PORCN抑制剂（如LGK974）对肿瘤干性的影响。

化疗与耐药机制

对5-FU敏感性中等，常用于 奥沙利铂耐药模型 构建（需长期低剂量诱导）。

研究 自噬激活 在化疗抵抗中的作用（如检测LC3-II/Beclin-1表达）。

类器官与微环境

3D培养中可模拟 肠隐窝结构，适用于肿瘤-成纤维细胞（CAFs）互作研究。

3. 标准化操作指南：

培养条件

基础培养基：McCoy's 5A + 10% FBS（优于DMEM，支持腺样结构形成）。

传代要点：

消化时间：5分钟（0.25%胰酶-EDTA），终止时需完全中和。

接种密度：8×103 cells/cm2（高密度易诱导自发分化）。

质量控制

分子验证：

季度检测PIK3CA突变（ARMS-PCR）和STR分型（比对ATCC HTB-38）。

功能验证：

丁酸钠诱导分化实验（2 mM处理72小时，检测ALP活性）

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10? cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。