HMCB人黑素瘤细胞

HMCB人黑素瘤细胞

 基本特性:

种属来源:人

性别年龄:未知

组织来源:皮肤

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮细胞

细胞规格:1 X 106cells/T25 或 1 mL 冻存管

培养条件:EMEM+ 10% heat inactivated fetal bovine serum (FBS)+1%HEPES37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3 传代, 2-3 天传 1 代

1. 细胞背景：

名称：HMCB（Human Melanoma Cell Line B）

类型：人皮肤恶性黑素瘤（转移性）

分子特征：

源自52岁女性患者淋巴结转移灶

BRAF V600E突变阳性，PTEN缺失

高表达PD-L1（免疫检查点分子）

具有显著侵袭性和血管拟态能力

2. 关键生物学特征：

参数  描述

形态  贴壁生长，多形性（梭形/星形混合）

标志物  S100+, HMB-45+, MITF+

基因特征  BRAF V600E, NRAS野生型

药敏特征  对维莫非尼敏感（IC50 0.1μM）

转移特性  自发肺转移（尾静脉注射后3周）

3. 培养体系：

培养基配方：

DMEM高糖 + 10% FBS + 1% NEAA

关键添加物：

10nM TPA（促进黑素瘤表型）

1mM丙酮酸钠（增强侵袭性）

传代规范：

0.25%胰酶-EDTA消化5分钟（37℃）

1:3比例接种于纤连蛋白包被培养皿

传代周期：3-4天（倍增时间30±2h）

冻存方案：

冻存液：90% FBS + 10% DMSO

程序：程控降温（-1℃/min）

必需检测：冻存前后BRAF突变验证

4. 研究应用：

分子机制：

MAPK通路耐药机制（如NRAS上调）

血管拟态（Vasculogenic Mimicry）研究

治疗开发：

方向  实验方案

靶向治疗  BRAF/MEK抑制剂联合用药

免疫治疗  PD-1抗体+IDO抑制剂组合

表观遗传干预  EZH2抑制剂（GSK126）处理

 质控标准

核心检测：

BRAF V600E突变验证（ARMS-PCR）

流式检测PD-L1表达（＞60%阳性）

支原体检测（每月PCR）

公司出售的产品：

注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10? cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。