10倍浓缩细胞裂解缓冲液

在分子生物学与细胞生物学研究中，高效、温和的细胞裂解是蛋白质组学分析、信号通路研究及药物筛选等实验的核心步骤。Cell Signaling Technology（CST）公司推出的Cell Lysis Buffer (10X)（货号：9803）凭借其优化的配方与广泛的适用性，成为科研人员提取全细胞蛋白的首选工具。本文将从产品组成、技术优势、操作流程及应用场景等维度，全面解析这款10倍浓缩细胞裂解缓冲液的性能特点。

一、产品组成与配方解析

Cell Lysis Buffer (10X)为15 mL装10倍浓缩液，其主要成分包括：

• Tris-HCl缓冲体系（20 mM，pH 7.5）：维持裂解过程的pH稳定性，保护蛋白天然构象。

• NaCl（150 mM）：模拟生理离子强度，减少非特异性蛋白聚集。

• 螯合剂（1 mM Na₂EDTA、1 mM EGTA）：螯合二价金属离子，抑制金属依赖性蛋白酶活性。

• 去垢剂（1% Triton X-100）：温和溶解细胞膜，释放胞内蛋白。

• 磷酸酶抑制剂（2.5 mM焦磷酸钠、1 mM β-甘油磷酸钠、1 mM Na₃VO₄）：抑制丝氨酸/苏氨酸及酪氨酸磷酸酶活性，防止蛋白去磷酸化。

• 蛋白酶抑制剂（1 µg/ml亮肽素）：抑制丝氨酸蛋白酶活性，减少蛋白降解。

使用建议：稀释至1×工作液后，CST推荐添加1 mM PMSF（苯甲基磺酰氟），以增强对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。

二、技术优势：高效、温和、兼容性强

1. 保留蛋白天然活性

   
   

   通过非变性裂解条件，最大限度维持蛋白的天然构象与翻译后修饰（如磷酸化），适用于下游Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫荧光（IF）等实验。

2. 广泛的细胞类型兼容性

• 贴壁细胞：如HeLa、HEK293等，推荐用量为每10 cm培养皿加入400 µL 1×裂解液。

• 悬浮细胞：如Jurkat、THP-1等，按每10⁷个细胞加入400 µL 1×裂解液。

• 组织样本：需结合机械匀浆（如组织研磨器）与超声破碎，建议按100 mg组织/mL裂解液比例使用。

3. 灵活添加抑制剂

   
   

   用户可根据实验需求，额外添加磷酸酶抑制剂混合物（如CST #5872）或广谱蛋白酶抑制剂（如CST #8553），进一步保护蛋白完整性。

4. 长期稳定性

   
   

   10×浓缩液于-20°C可稳定保存24个月，1×工作液建议分装后-20°C保存，避免反复冻融。

三、操作流程：标准化裂解步骤

1. 细胞处理

• 贴壁细胞：吸除培养基，用预冷PBS洗涤两次，加入适量1×裂解液（如10 cm培养皿加400 µL）。

• 悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS洗涤后重悬于1×裂解液中。

2. 裂解与提取

• 冰上孵育：细胞与裂解液混合后，于冰上静置5分钟，使细胞充分裂解。

• 机械破碎：对未完全裂解的样本，可进行短暂超声处理（如3次5秒脉冲）。

• 离心澄清：4°C下14,000×g离心10分钟，收集上清用于后续实验。

3. 组织裂解优化

• 将组织剪碎后，按比例加入2×浓度裂解液（如100 mg组织加1 mL 2×裂解液），结合匀浆与超声处理，确保细胞充分破碎。

四、应用场景：覆盖多领域科研需求

1. 信号通路研究

   
   

   用于检测蛋白磷酸化水平（如AKT、ERK通路）及蛋白相互作用（如免疫共沉淀），助力解析细胞增殖、凋亡等生物学过程。

2. 疾病机制探索

   
   

   在癌症、神经退行性疾病等模型中，提取病变细胞蛋白，分析差异表达蛋白及修饰变化。

3. 药物筛选与靶点验证

   
   

   结合CST PathScan® ELISA试剂盒，评估药物对信号蛋白活性的影响，加速候选化合物筛选。

4. 蛋白组学研究

   
   

   提供高质量蛋白样品，兼容质谱分析，支持蛋白质表达谱与翻译后修饰的系统研究。

五、用户反馈与质量保障

CST通过严格的质量控制体系，确保每批产品的特异性及稳定性。用户反馈显示，该缓冲液在裂解效率与蛋白保护方面表现优异，尤其适用于对蛋白活性要求严苛的实验（如磷酸化蛋白检测）。此外，CST提供全面的技术支持，包括裂解条件优化、抑制剂选择等，助力用户解决实验难题。

六、规格与订购信息

• 货号：9803

• 规格：15 mL（10×浓缩液）

• 储存条件：-20°C（长期保存），4°C（短期使用，1-2周）

  
  

结语

Cell Lysis Buffer (10X)以其高效、温和、兼容性强的特点，成为细胞裂解领域的标杆产品。无论是基础研究还是药物开发，它都能为科研人员提供高质量的蛋白样本，助力突破性成果的诞生。立即选择CST Cell Lysis Buffer (10X)，开启您的精准科研之旅！