单克隆抗体制备（免疫小鼠或兔）

单克隆抗体制备（免疫小鼠或兔）服务内容

一、参数信息

     免疫动物与规模

1.               小鼠：常用 BALB/c（6-8 周龄雌性，4-6 只）、C57BL/6，支持基因工程小鼠（需客户提供）

2.               家兔：新西兰白兔（2-3kg 雌性，1-2 只），适用于高亲和力抗体筛选

3.               融合细胞系：小鼠来源 SP2/0 或 NS0 细胞（支原体检测阴性），兔源融合需定制化技术平台

抗原要求

1.               重组蛋白：纯度≥90%（提供 HPLC 验证），推荐用量 100-200μg / 小鼠、1-2mg / 兔

2.               合成多肽：需偶联 KLH/BSA（默认提供抗原设计与偶联），含 1-2 个独特表位（避开同源序列）

3.               特殊抗原：细胞裂解物 / 病毒样颗粒（需生物安全二级以上操作，加收 20% 处理费）

   技术参数

1.               筛选方法：ELISA 初筛（效价≥1:50,000）+ 免疫印迹（WB）验证特异性

2.               克隆化：有限稀释法（≥3 轮）或流式细胞单细胞分选（保证单克隆源性＞99%）

3.               抗体形式：

1.               培养上清（体积≥50mL，抗体浓度≥50μg/mL）

2.               小鼠腹水（体积≥5mL，浓度≥5mg/mL，需提前注射 Pristane 佐剂）

3.               纯化抗体（Protein A/G 亲和层析，纯度≥95%，可选 IgG 亚型纯化）

   服务周期

1.               小鼠：8-12 周（免疫 4-6 周 + 融合筛选 4-6 周）

2.               家兔：12-16 周（免疫 6-8 周 + 兔源杂交瘤建系周期延长）

3.               加急服务：缩短至 6-8 周（限小鼠，加收 50% 加急费）

二、使用信息

   服务流程

1.               免疫阶段：按定制方案进行 3-4 次基础免疫（佐剂可选弗氏 / 铝佐剂），末次免疫后 3-5 天取脾 / 淋巴结细胞

2.               细胞融合：脾细胞与骨髓瘤细胞按 5:1 比例融合，HAT 培养基筛选 7-10 天，获得杂交瘤克隆

3.               筛选鉴定：① 多孔板初筛（ELISA 检测阳性孔）② 亚克隆化（有限稀释法确保单克隆性）③ 功能验证（WB/IHC/FCM 检测抗体活性）

4.               产物交付：提供杂交瘤细胞株（冻存管≥3 支）、抗体样本及完整报告（含表位分析、亚型鉴定、亲和力常数）

  适用场景

1.               高特异性抗体开发（适用于免疫组化、流式细胞术、抗体药物研发）

2.               稀有抗原检测（单克隆抗体低交叉反应特性）

3.               诊断试剂盒原料制备（需提供抗体亚型及纯化工艺参数）

   客户需提供材料

1.               抗原样本（序列信息、浓度、保存条件，多肽需明确表位氨基酸序列）

2.               免疫动物选择及特殊要求（如无血清培养、人源化抗体初步筛选）

3.               目标抗体应用场景（功能验证方向需提前沟通）

三、注意事项

   实验前

1.               抗原需通过内毒素检测（＜5EU/mg），高内毒素可能导致融合效率下降

2.               小鼠免疫前建议进行预实验（预评估抗原免疫原性，降低项目风险）

  实验中

1.               融合效率受免疫效果影响，若初筛阳性孔＜5%，可免费重启一次融合（限同批次抗原）

2.               兔源单克隆需额外 3-4 周进行杂交瘤细胞适应性培养，周期可能延长

   实验后

1.               杂交瘤细胞株需液氮保存，复苏存活率保证≥80%（提供复苏检测报告）

2.               腹水样本需添加 0.02% 叠氮钠防腐，-80℃分装保存（避免反复冻融导致抗体降解）

   质量与合规

1.               提供抗体亲和力检测（SPR/BLI 法，可选 KD 值测定，加收 15% 服务费）

2.               实验动物操作符合 GLP 规范，可提供 AAALAC 认证资质及伦理审查文件（如需）

3.               严格保密客户抗原序列及细胞株信息，数据默认保存 1 年（可申请长期托管）