BCECF, AM pH荧光探针，细胞实验

产品描述

BCECF, AM是一种检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性，进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF，一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。 BCECF在细胞内稳定，排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现，通过确定pH依赖性的发射光强度比率，使用荧光分光光度法或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM主要用于哺乳动物细胞，也用于植物细胞、酵母等的细胞pH水平检测。

BCECF, AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。

参数信息

英文名称：2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein acetoxymet

中文名称：2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰甲酯

CAS NO：117464-70-7

分子式：C40H36O19

分子量：820.70

闪点：85°C

沸点：692.41°C

密度：1.2837

状态：橙色固体

Ex/Em：503/528

溶解性：溶于乙腈，DMSO，DMF

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

体外研究

处理的细胞显示氢基因体，其电子密度沉积物以不同程度聚集。在某些情况下，在氢酶体内部可见染色。显微镜下还观察到，K+/H+离子载体尼日利亚菌素不抑制氢基因体装载BCECF-AM。ph敏感荧光染料测定细胞质ph值。在DMSO.2中配制2至20 mM的BCECF-AM原液。在缓冲溶液中制备5-50 μM BCECF-AM染料上样液。

3在细胞板中加入1000 μL/孔（6孔）、100 μL/孔（96孔）或25 μL/孔（384孔）的BCECF-AM上染液。将上染板在细胞培养箱中培养30-60分钟。洗净，用缓冲液替换染料上料液。通过在Ex/Em = 490/535 nm或430/535 nm处监测荧光来运行pH测定。

细胞实验

PASMCs被放置在层流细胞室中，灌注了pH调节到7.4的HBSS。pHi是用ph敏感荧光染料BCECF-AM的膜渗透形式在37°C、20%O2-5% CO2气氛下培养60分钟的细胞中测量的。然后用HBSS在37°C下洗涤细胞15分钟，以去除细胞外染料，并使胞质染料完全去酯化。BCECF荧光的比例测量是在一个工作站进行的，该工作站由Nikon TSE 100椭圆倒置显微镜组成，带有外延荧光附件。氙灯的光束在490 nm和440 nm处经过干涉滤光片过滤，通过20倍荧光物镜聚焦到PASMCS上进行检测。从细胞发射的530纳米的光通过物镜返回，并由成像相机检测。使用电子快门来减少染料的光漂白。pHi是根据每次实验后的现场校准估计的。细胞灌注含有（mM）： 105 KCl, 1 MgCl2, 1.5 CaCl2, 10葡萄糖，20 HEPES-Tris和0.01尼日利亚菌素的溶液，以使pHi与外部ph平衡。当pHi用KOH从6.5调整到7.5时，通过荧光测量产生两点校准。细胞内H+离子浓度（[H+]i）由pHi计算，公式为pHi = - log （[H+]i）。