ER-Tracker Red, for live-cell imaging，实验方法和注意事项

产品描述

ER-Tracker dyes是一系列细胞膜渗透性的活细胞染料，选择性结合内质网（ER）。对细胞染色和甲醛处理后，可以保留部分的活细胞染色特征。 ER-Tracker Red是一种药物的荧光偶联物，即BODIPY™ TR标记的格列苯脲（BODIPY™ TR Glibenclamide）。格列本脲，又名优降糖（Glyburide），是一种磺酰脲类口服降糖药，用来调查胰岛素β细胞活性和胰岛素分泌，以及研究心肌细胞功能和心律失常。

格列本脲能够结合内质网上突出的ATP敏感性钾通道（KATP）的磺脲类受体。

本品为DMSO储存液，浓度为1mM。用于活细胞内质网染色，建议工作浓度约为1µM，需根据实际情况做调整。

参数信息

分子式：C44H42BClF2N6O7S2

分子量：915.2316

检测滤片：TRITC

状态：液体

Ex/Em：587/615nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

实验方法

以下实验方案是根据牛肺动脉内皮细胞（BPAE）调整所得，且已验证可用于其他常规细胞系的染色。建议以下步骤作起始实验的参考，请根据具体的细胞类型和实际情况来调整标记条件。

1.试剂准备

ER-Tracker Red以1mM的DMSO储存液形式提供，使用前请将ER-Tracker Red 从冰箱内取出，确保回温至室温或于25℃水浴温育直至完全融解，经短暂离心将溶液沉到管底。使用前将储存液根据单次用量分装，≤-20ºC避光干燥保存。

2.细胞染色

（1）制备染色工作液：将1mM ER-Tracker Red稀释至工作浓度，建议工作浓度~1µM。为了减小染料过高引起的假象，建议使用能达到实验目的的低浓度来完成染色。

【注】：在含Ca2+/Mg2+ 的Hank’s 平衡盐溶液内进行染色可得到良好的结果。

（2）细胞染色：对于贴壁细胞，吸除培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养基，并在荧光显微镜下观察细胞。如果细胞需要固定，请跳转到步骤3。

3.细胞固定

（1）固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2min。

（2）清洗和观察细胞：固定后，用合适缓冲液清洗2次，每次5min。之后可进一步染色或滴加抗荧光淬灭剂封片后观察。

【注】：不建议进行透化处理，因用Triton X-100做透化处理会导致荧光信号消失。

注意事项

1）整个染色过程中需注意避光。

2）ER-Tracker Red（1mM）在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体沉降至管底，再开盖使用。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。