CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate）使用方法和注意事项

简要介绍

CFDA（5(6)-Carboxyfluorescein diacetate），是一种细胞膜渗透性的酯酶底物，用作一种活细胞探针，能用来测定激活其荧光所需的酶活性，也能用来检测维持荧光产物保留在胞内的细胞膜完整性。

一旦被胞内酯酶水解后，代谢产生羧基荧光素（Carboxyfluorescein, CF）。与荧光素相比，羧基荧光素含有负电荷较多，从而能保留在胞内。

物理性质

【英文名称】：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate

【中文名称】：5(6)-羧基荧光素二乙酸酯

【CAS NO】：124387-19-5

【分子式】：C25H16O9

【分子量】：460.39 g/mol

【状态】：浅黄色粉末

【Ex/Em】：492/517nm

【溶解性】：溶于DMSO

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

使用方法和注意事项

5(6)-CFDA 工作液的制备

1. 储备液的制备

将 1 mg 5(6)-CFDA 溶解在 0.21 mL DMSO 中，得到 10 mM 的 5(6)-CFDA。

注意：建议储备液在 -20℃、-80℃避光保存，避免反复冻融。

2. 5(6)-CFDA 工作液

用无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备液，得到 1-10 μM 的 5(6)-CFDA 工作液。

注意：请调整浓度 5(6)-CFDA 工作液根据实际情况而定。

细胞染色

1.细胞制备：

悬浮细胞：4°C 1000 g 离心 3-5 分钟，然后弃去上清液。PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。

贴壁细胞：弃去细胞培养基，加入胰蛋白酶解离细胞，制成单细胞悬液。在 4°C 下以 1000 g 离心 3-5 分钟，然后弃去上清液。PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。

2. 加入1 mL 5(6)-CFDA 工作液，室温孵育 30 分钟。

3. 400g 离心 4℃ 3-4 分钟，弃上清。

4. PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。

5. 用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞，然后荧光显微镜或流式细胞仪检测。

注意事项

1、建议储备液避光保存在 -20℃ 或 -80℃，避免重复冻融循环。

2、请根据实际情况调整 5(6)-CFDA 工作液的浓度。

3、本品只供研发使用，不得用于临床、家庭或其他用途。

4. 为了您的安全和健康，请穿白大褂，戴一次性手套操作。