CFDA, SE细胞增殖示踪荧光探针的使用步骤

简要描述

CFDA-SE，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸 基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。

该染料进入细胞后主要定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的染色效果较强。

CFDA-SE 染料可用于检测细胞增殖，CFDA-SE 可随着细胞的分裂增殖而被子代细胞均匀继承，其含量的衰减与细胞分裂次数成正比，该荧光信号可在488 nm 的激发光下进行检测，并可通过流式细胞仪进行分析。

参数信息

英文名称：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester

中文名称：5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯

CAS NO：150347-59-4

分子量：557.46

熔点：152-154 °C

酸度系数(pKa)：6.45(at 25℃)

状态：黄色粉末

Ex/Em：492/517nm

溶解性：溶于DMSO，DMF

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

使用方法

1.CFDA-SE 工作液的配制
（1）储备液的配制
取 1 mg CFDA-SE 溶于 0.1794 mL DMSO 中，得到 10 mM CFDA-SE。
注：原液建议 -20℃ 或 -80℃ 避光保存，避免反复冻融。
（2）CFDA-SE 工作液的配制
在无血清细胞培养中稀释原液
注意：请根据实际情况调整 CFDA-SE 工作液的浓度。
2.细胞染色
（1） 悬浮细胞：4℃，1000 g 离心 3-5 分钟，弃上清。PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟；贴壁细胞：弃去细胞培养基，加入胰蛋白酶解离细胞，制成单细胞悬液。4℃ 1000 g 离心 3-5 分钟，弃上清。PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。
（2）加入 1 mL CFDA-SE 工作液，室温孵育 30 分钟。
（3）4℃，400 g 离心 3-4 分钟
（4）PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。
（4）用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞，荧光显微镜或流式细胞仪检测。

注意事项

（1）避光操作，全程避免光照以保护荧光基团；

（2）母液分装后-20℃冻存，避免反复冻融；

（3）科研或工业用途，不可用于临床诊断。