Dihydroethidium (DHE) 二氢乙锭，工作液的制备和细胞染色的步骤

一、简要描述

二氢乙锭（Dihydroethidium，DHE），也称为Hydroethidine，是一种常用的超氧化物阴离子荧光检测探针。

DHE本身是一种细胞膜渗透性的蓝色探针（λ Ex/λ E m: 370/420nm），进入细胞后与超氧化物阴离子反应，生成2-hydroxyethidium。2-hydroxyethidium插入核酸后产生红色荧光（λ Ex/λ Em: 535/610 nm）， 能够被荧光显微镜、流式细胞仪等仪器检测。

作为一种选择性且灵敏的荧光探针，DHE能用来检测吞噬细胞呼吸爆发中的活性氧（ROS）水平，也能用来检测培养细胞中的超氧化物阴离子水平。

DHE也能用作活体染料，流式检测中用于完整细胞的成像和功能分析。还能用在各种凋亡模型中观察荧光的增强。另外，DHE也能用于活细胞线粒体超氧化物生成的检测，其结构类似物MitoSOX Red具有线粒体定位能力。通常情况30~40min内能得到均匀标记的细胞。

二、参数信息

英文名称：Dihydroethidium

中文名称：二氢乙锭

CAS NO：104821-25-2

分子式：：C21H21N3

分子量：315.41

沸点：580.4±50.0 °C

酸度系数(pKa)：5.30±0.40

状态：固体

Ex/Em：370/420nm（活细胞细胞质内荧光检测）；535/610nm（活细胞染色质荧光检测）

溶解性：溶于DMSO（10mg/ml），DMF，无水乙醇和氯仿（20 mg/ml）

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

三、使用方法

【Dihydroethidium 工作液的制备】

1.储备液的制备
取1mg Dihydroethidium 于0.31mL DMSO中，得到10mM Dihydroethidium。
注意：建议储备液在-20℃或 -80℃避光保存，避免反复冻融。
2.Dihydroethidium 工作液的制备
稀释在无血清细胞培养基或PBS中加入1-10 μM的 Dihydroethidium 工作液。
注意：请根据实际情况调整Dihydroethidium 工作液的浓度。

【细胞染色】

（1）悬浮细胞：4℃，1000g离心3-5分钟，弃上清。PBS洗涤2次，每次5分钟；贴壁细胞：弃去细胞培养基，加入胰蛋白酶解离细胞，制成单细胞悬液。在 4°C 下以 1000 g 离心 3-5 分钟，然后弃去上清液。PBS洗涤2次，每次5分钟。
（2）加入1mL Dihydroethidium 工作液，室温孵育30分钟。
（3）4℃，400g离心3-4分钟，弃上清。
（4）PBS洗涤2次，每次5分钟。
（5）用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，荧光显微镜或流式细胞仪检测。

四、注意事项

1. 假阳性控制：需设置超氧化物歧化酶（SOD）或特异性抑制剂（如DPI）作为阴性对照，排除非特异性氧化信号。

2. 浓度调整：建议工作浓度为1 - 10 μM，浓度过高可能导致自发荧光干扰。

3. 数据解读：结合其他检测方法（如电子自旋共振、化学发光法）验证结果可靠性

五、同类型更多试剂

• RH795膜电位荧光探针

• DiBAC4(5)膜电位荧光探针

• DiOC2(3)绿色膜电位荧光探针

• Hypoxyprobe-F6(CCI-103F) 缺氧探针

• HypoxyprobeTMCY7 Kit 缺氧探针检测试剂盒

• HypoxyprobeTM RedPe Kit缺氧探针检测试剂盒

• H2DCFDA(DCFH-DA)活性氧荧光探针/ROS荧光探针

• MitoA(Mitochondrial H2S Probe)线粒体硫化氢探针

• tert-Butyl hydroperoxide(TBHP) Solution叔丁基过氧化氢溶液