Hypoxyprobe-F6（CCI-103F），实验的步骤

简要描述

在细胞生物学中，缺氧是一种普遍存在的现象，比如在神经疾病等病理状态下。为了深入了解缺氧的生物学机制及其在疾病发展中的作用，科学家们开发了多种缺氧探针。Hypoxyprobe-F6（CCI-103F）研究缺氧的工具之一。

Hypoxyprobe-F6（CCI-103F）是一种用于检测缺氧细胞的化合物。它能与在缺氧条件下产生的生物分子反应，形成稳定的加合物，从而使研究者能够准确识别和定量缺氧区域。该探针在细胞和组织切片中应用较广，是缺氧研究的检测手段之一。

工作机制

Hypoxyprobe-F6的工作机制基于其与组织中硫醇类化合物的反应。在低氧环境下，Hypoxyprobe-F6被还原激活并与细胞内的巯基反应，形成特异性的加合物。这些加合物可以通过抗体染色等免疫检测技术进行可视化，从而在组织切片上明确标记缺氧区域。通过这种方式，研究者能够获得有关缺氧的定量和定性数据。

实验流程

使用Hypoxyprobe-F6进行缺氧检测的实验步骤相对简单。

1. 将Hypoxyprobe-F6通过注射等方式引入实验动物体内。

2. 收集组织样本并进行处理，使用特异性抗体进行染色。

3. 通过显微镜观察和分析缺氧细胞的分布情况。

缺氧探针试剂盒核心组分为：缺氧探针（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探针的抗体。不同试剂盒中的探针和抗体标记不同（可应用于免疫荧光（IF），免疫组化（IHC），WB或流式细胞分析（FC））。

注意事项

体内实验：建议腹腔注射，剂量范围1 - 60 mg/kg（根据模型调整），注射后1 - 3小时采集样本。

体外实验：细胞培养液中使用浓度建议10 - 100 μM，作用时间1 - 4小时。

检测方法：需配合抗Hypoxyprobe抗体及二抗体系，实验前需排除内源性过氧化物酶干扰。