DiOC6(3)内质网荧光探针，染色液的制备方法

一、简单描述

DiOC6(3)，是一种具细胞膜渗透性、发绿色荧光的亲脂性染料。作为一种膜探针，DiOC6 (3)在高浓度下能对活细胞和固定细胞的内质网（高尔基体）染色，也能对囊泡膜和线粒体染色。而在低浓度下，偏向选择性染色线粒体。

DiOC6(3)能用来标记活细胞。

神经元和酵母细胞中，DiOC6(3)曾用来研究内质网（ER）结构的相互作用和动力学；当染料浓度提高或在某些呼吸缺陷的酵母菌株内，DiOC6(3)能特异性染酵母核膜，而且具足够灵敏性来揭式核膜的变化。

二、物理参数

英文名称：3，3'-Dihexyloxacarbocyanine iodide (DiOC6(3) iodide)

中文名称：3，3′-二己基含氧碳菁碘代物

CAS NO：53213-82-4

分子式：C29H37IN2O2

分子量：572.52

熔点：219-221°C

密度：1.2837

状态：红色粉末

Ex/Em：484/501nm（in methanol）

溶解性：溶于DMSO，DMF，无水乙醇，微溶于水

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

三、使用说明

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件和具体的应用来做出调整。

1.染色液制备

储存液制备：用 DMSO或无水乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取10mg DiOC6(3)溶于3.49ml 无水DMSO中，溶解后得到5mM的储存液。

【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

工作液制备：用缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。

【注意】：工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来调整。 

2.悬浮细胞染色

加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间。

孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

四、同类型更多试剂

• RH795膜电位荧光探针

• Di-4-ANEPPS膜电位荧光探针

• DiOC2(3)绿色膜电位荧光探针

• WSP-5 (H2S Probe)硫化氢荧光探针

• Cyanine 5.5 bissuccinimidyl ester

• Cyanine 5 monosuccinimidyl ester

• JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit

• Rhodamine123罗丹明123（线粒体膜电位荧光探针）

• Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

• MKBio ER-Tracker Green for live-cell imaging 内质网绿色荧光探针

• ER-Tracker Red (BODIPYTM TR Glibenclamide), for live-cellimaging内质网红色荧光探针