Rhod-2 Trisodium Salt 钙离子荧光探针的使用方法与注意事项

简要描述

Rhod-2三钠盐（Rhod-2 Trisodium Salt）是一种水溶性、较高亲和力的可见光激发的钙离子荧光探针。类似于Fluo-3或Fluo-4，其激发和发射光谱不会随着Ca2+浓度变化发生明显的迁移，荧光信号一旦与Ca2+结合后会增强，Ex/Em=549/578 nm。Rhod-2三钠盐不具细胞膜渗透性，可通过微注射或划痕标记加载进入细胞。

参数信息

英文名称：Rhod-2 Trisodium Salt

中文名称：Rhod-2三钠盐

分子式：C40H39N4Na3O11

分子量：820.73

状态：暗红色固体

Kd（Ca2+结合）：570NM

Ex/Em：549/578

溶解性：溶于水

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

使用方法与注意事项

【溶解与配置】：

推荐用纯水溶解，配制成储存液（如1-5 mM）后分装保存。

实验时需添加0.04% Pluronic F-127（防止探针聚集）和有机阴离子转运抑制剂（如丙磺舒，0.5-1 mM）以提高加载效率。

【加载步骤】：

去除细胞培养基中的血清和酚红（避免干扰自荧光）。

用缓冲液（如HHBS）洗涤细胞后，加入Rhod-2 Trisodium Salt工作液（终浓度4-5 μM）。

37℃孵育30-60分钟，再用缓冲液洗涤去除残留探针。

【检测设备】：
可用于激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪，需使用549 nm激发滤片和578 nm发射滤片。

【注意事项】：

- 储存条件：建议 - 20℃避光干燥保存，AM酯需防潮。

- 加载方法：钠盐需物理导入（如显微注射），避免酯酶抑制剂干扰。

- 信号校准：建议结合钙离子载体（如离子霉素）进行细胞内Ca²⁺浓度的定量分析。