JC-10线粒体膜电位荧光探针的使用方法

一、简要介绍

JC-10是一种替换JC-1，用于检测线粒体膜电位的荧光探针。JC-10以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。

正常线粒体内，JC-10聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=540 nm, Em=590 nm）；

不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10 只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525 nm）。

JC-10不但用于定性检测，因颜色的变化可以直接反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

二、物理性质

【化学名称】：5,6-Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide

【分子式】：C25H27Cl2IN4

【分子量】：~600

【状态】：红色粉末

【溶解性】：DMSO

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

三、使用方法

1.染色工作液制备 

（1）JC-10储存液制备：取本品溶于无水DMSO配制成2mg/ml储存液，混匀后，按照单次用量分装，避光冻存，避免反复冻融。

（2）JC-10（1×）工作液制备：取一管JC-10储存液置于室温，使其融化，之后用缓冲液配制成10-30μM的1×工作液，漩涡混匀待用。

注：对于某些细胞系pH8的工作液可能防止JC-10泄露。

2.JC-10染色步骤（荧光酶标仪）

（1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

（2）按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入JC-10工作液到培养孔内。

（3）将整个培养板置于37℃，5% CO2孵育15-60min。

（4）用荧光酶标仪监测Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化，计算两者荧光信号比值，以判断细胞健康程度。

注：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议调整孵育时间。

【可选】：吸掉JC-10染色工作液，按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入HHBS缓冲液或其他生理缓冲液，然后再进行荧光信号分析。

3.JC-10染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）

（1）用待测化合物处理细胞4-6h以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的化合物缓冲液。

（2）离心去上清，调整细胞密度为1-5×105细胞/管。

（3）用500µl JC-10染色工作液重悬细胞。

（4）室温孵育或37℃，5%CO2孵育10-30 min，避光。

（5）用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化；或者用流式细胞仪（FL1和FL2通道进行检测）。

注：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议调整孵育时间。

【可选】：离心后吸掉JC-10染色工作液，加入500µl HHBS缓冲液或其他缓冲液重悬细胞使其密度为1-5×105细胞/管，然后再进行荧光分析。

四、注意事项

储存与稳定性：避光保存于-20℃，避免反复冻融，有效期通常为12个月；染色后需在30分钟内完成检测，避免荧光信号衰减。

细胞依赖性：不同细胞系对JC-10的响应可能存在差异，需优化孵育时间及浓度（如HeLa细胞与Jurkat细胞条件不同）。

安全防护：操作时需佩戴手套，避免直接接触强光或高温环境。

五、更多试剂

DiOC2(3）绿色膜电位荧光探针

DiOC6(3）内质网荧光探针

CCCP(Powder)凋亡诱导剂/质子载体

FCCP(50mM)凋亡诱导剂/质子载体

WSP-1 (H2S Probe)硫化氢荧光探针

WSP-5 (H2S Probe)硫化氢荧光探针

CAY10731 (H2S Probe)硫化氢荧光探针

DiRIodide(DilC18(7)细胞膜深红色荧光探针

BCFL Acid (Superior replacement for BCECF Acid) pH荧光探针

Pollen Viability Test Kit (Peroxidase Assay)花粉活力检测试剂盒

Peroxidase from Horseradish, Conjugation Grade 辣根过氧化物酶

5-(and-6)-Carboxy SNARF-1，Acetoxymethyl Ester，AcetatepH荧光探针

原包装应尽量选择避光，阴暗，干燥的地方进行存放，同时此试剂仅用于科研实验。

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