HP80201基础型RAA核酸扩增试剂（冻干颗粒）

重组酶介导链置换核酸扩增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一种恒温核酸快速扩增技术。RAA是利用从细菌或真菌中获得的重组酶在常温下可与引物DNA紧密结合，形成重组酶/引物复合体，侵入RNA-cDNA双链核酸模板，在侵入位点重组酶将双链打开，同时单链结合蛋白结合到被重组酶打开的单链上，维持双链模板处于开链状态。重组酶/引物复合体开始对双链进行扫描，当引物在模板上搜索到与之完全匹配的互补序列时，重组酶/引物复合体解体，DNA聚合酶结合到引物的3’端，开始合成新链。合成的新链又可以作为模板，最终扩增产物以指数级增长，完成靶标基因的扩增，可用电泳法进行判读。RAA冻干颗粒具有快速、灵敏度高以及特异性强等优点，反应组分已混合并冷冻干燥成核酸扩增试剂，操作简便，易于保存。

订购信息：

检测原理：

RAA冻干颗粒是基于重组酶介导链置换核酸扩增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技术开发的恒温核酸扩增检测试剂，在39～42℃恒温条件下特异识别并扩增目标样本的核酸片段，可配合电泳法进行检测判断。

产品用途：

RAA冻干颗粒可应用于核酸DNA 的快速扩增。

储存及有效期：

本产品存储于2~28℃、干燥、避光条件下，有效期为12 个月。

引物设计：

RAA核酸扩增技术对引物设计的要求与常规PCR引物设计有一定的区别。由两条寡核苷酸组成一对引物，分别特异性识别一个核酸目标物的上下游核苷酸序列；引物长度在28-35 nt之间，序列中无回文序列、连续单碱基重复序列和内部二级结构区；引物Tm值不作为设计时主要考虑因素。建议在开展RAA（基础型）扩增反应之前，先进行引物的筛选试验，以便得到较高的检测灵敏度。

探针设计建议方法：探针长度在46-52 nt之间，序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基；探针的5’端用一种抗原标记物标记，通常为FAM基团或羧基荧光素；内部含有碱基核苷酸类似物替换核苷酸（例如四氢呋喃残基THF-有时称为'dSpacer'）；3’末端有聚合酶延伸阻断基团（例如C3-spacer，磷酸基或双脱氧核苷酸）。如下图所示：

注意：在开始实验前检查探针5’端标记的基团与下游引物5’端标记的基团是否与所用的试纸条相匹配；建议在开展 RAA试纸条型扩增反应之前，先进行引物的筛选试验，以便得到较高的检测灵敏度。

产品说明：

1. 本产品是“Ready to Use”即用型 RAA冻干颗粒；含有除引物所有的反应要素，如重组酶、DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。

2. 试剂盒最低检测下限为 10-100copies/测试（依据引物筛选优化程度和检测手段）。

3. RAA试剂，仅扩增DNA。

4. 基础型试剂，适用于电泳法分析条带。

适用仪器：

恒温金属浴、恒温水浴锅。

检测步骤：

1. 核酸样本提取：请参考传统DNA 提取方法或其他同效商品化试剂盒提取DNA样本。

2. 样本检测

2.1 反应体系： 单管反应体系（25μL）：

2.2 操作步骤 

2.2.1 根据反应数量，按照反应体系配制含有水、上游引物(10 μM)、下游引物(10 μM)的 Mix，混合均匀后加入装有核酸扩增试剂的检测单元管中； 

2.2.2 向检测单元管中加入经步骤1处理得到的待测DNA样本；

2.2.3 再向检测单元管盖上加入1.5~2.5 μL 的Mg2+，盖上管盖，上下颠倒 轻甩充分混匀5-6次，低速离心10 sec； （注：本步骤“是否充分混匀”将决定实验结果的重复性） 

2.2.4 将检测单元管放入37~40℃ 恒温金属浴（或恒温水浴锅）中，孵育30min。

结果分析与判定： 

可以根据琼脂糖电泳、试纸条或荧光法判定实验结果。

注意事项：

1. 试剂条检测，推荐使用免开盖的装置进行试纸条检测，避免气溶胶污染。 

2. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文，并严格按照要求进行操作。 

3.不同类型样品所提取的核酸含量和纯度有差异，可能导致扩增效率不同。 

4.当实验室环境、试剂、仪器或配件存在阳性物质（例如质粒、扩增产物等）污染，或样本间存在交叉污染的情况时，会影响检测结果准确性，出现假阳性结果。

5. 务必保证试剂保存、配制或运输得当，否则可能导致试剂检测性能下降，出现假阴性结果。 

6. 阳性对照为质粒，适用于评价本试剂核酸扩增性能。 

7. 请严格按照基因扩增实验室的管理规范进行操作。 实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理。

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