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人腺病毒D32型探针法荧光定量PCR试剂盒Human Adenovirus D32(HAdV-D32) 新品

3990 1盒 起订
上海 更新日期:2024-11-13

上海晶风生物科技有限公司

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产品详情:

中文名称:
人腺病毒D32型探针法荧光定量PCR试剂盒Human Adenovirus D32(HAdV-D32)
品牌:
晶风生物
产地:
上海
保存条件:
-20℃
纯度规格:
99
产品类别:
PCR检测试剂盒 荧光定量探针法PCR试剂盒
货号:
1593038
用途:
科研实验
产品规格:
50次/盒

人腺病毒D32型探针法荧光定量PCR试剂盒Human Adenovirus D32(HAdV-D32)的特点

1. 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研。

15.jpg


包装规格及成份(具体信息详见説明书,以説明书为准)

成份编号十孔盒包装
探针法 qRT-PCR 缓冲液A500μL(黄盖)
探针法 qRT-PCR 酶混合液B100μL(红盖)
荧光 PCR 专用模板稀释液C1 mL(黄盖)
探针法 qRT-PCR引物混合液D100 μL(白盖)
 qRT-PCR 探针E50 μL(棕色管)
探针法 qRT-PCR阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)F50 μL(黄盖)
使用手册G一份

人腺病毒D32型探针法荧光定量PCR试剂盒Human Adenovirus D32(HAdV-D32)使用方法

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,

千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,

只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备

7. 如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释

液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也以选购本公司的柱式病毒RNAout。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取

的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为RT-PCR模板,省略了RNA提取步骤。

三、Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR 管,其中N+2个用于上步得到的 N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。

如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4 个PCR管,

其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),

1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存

好后最后加):

    成分样品管N+2RT-PCR阴性对照管标准曲线样品管
    2-7 管)
    探针法qPCR缓冲液各 10 μL10 μL各 10 μL
    探针法 qPCR 酶混合液各 2 μL2 μL各 2 μL
    qRT-PCR探针各 1 μL1 μL各 1 μL
    探针qRT-PCR
    引物混合液
    各 2 μL 2 μL各 2 μL
    待测样品 RNA 模板各 5 μL----
    超纯水--5 μL--
    第 7 步所得标准曲线样品稀释液(2-7 号)----各5 μL(2号样到2号管,3号样到3 号管…)
    1. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 qRT-PCR:

    过程温度时间
    逆转录50℃30 min
    预变性94℃10 min
    qRT-PCR 反应(40 个循环)94℃15 sec
    60℃1 min(采集 FAM 通道的荧光信号)

四、数据处理

11.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的log值,再推算出其浓度。

12.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于39。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于39则为阳性。如果在39-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。


人腺病毒D32型探针法荧光定量PCR试剂盒Human Adenovirus D32(HAdV-D32)【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存

有效期 12 个月。


人腺病毒D32型探针法荧光定量PCR试剂盒Human Adenovirus D32(HAdV-D32)注意事项

1操作严格按照说明书进行;

2试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

3反应液应避光保存;

4反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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公司简介

上海晶风生物科技有限公司拥有一个蓬勃朝气的年轻团队,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有“晶风生物”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内享有一定的声誉,深得新老客户厚爱。本着“服务、诚信、进取”的精神,坚持沟通你我,创新服务,为国内外广大用户提供产品和服务。

成立日期 (4年)
注册资本 100万人民币
员工人数 1-10人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 贸易,工厂,试剂
主营行业 化学试剂,医药原料

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