| 名称 | KN-93 Phosphate |
| 描述 | KN-93 (Phosphate) can competitively block the binding of calmodulin to the corresponding kinase. It is a calcium/calmodulin-dependent kinase II (CaMKII) inhibitor with a Ki of 370 nM. It can also inhibit the proliferation of human hepatic stellate cells. |
| 细胞实验 | NIH 3T3 fibroblasts are cultured on polystyrene dishes in DMEM and fetal bovine serum, supplemented with penicillin/streptomycmn in a 5% CO2 humidified chamber at 37 癈. Cell growth is measured by using the MTT dye reduction method. (Only for Reference) |
| 激酶实验 | Measurement of activities of autophosphorylated/non-autophosphorylate CaMKII: CaMKII activity is measured utilizing syntideII as a substrate. Purified CaMKII is pre-incubated in the assay mixture ( 35 mM Hepes-Na ( pH 8.0 ), 10 mM MgC12, 0.5 μM CaM, 5 μM ATP, 1 mM CaCl2 or 1 mM EGTA, total 25 μL) at 30 °C for 2 minutes. After this pre-incubation, the protein substrate/radioactive ATP mixture is added to the same test tube and the preparation is further incubated at 30 °C, for 5 minutes ( final assay condition; 35 mM Hepes-Na (pH 8.0), 10 mM MgCl2, 0.125 μM CaCl2, 20 μM syntideII, 11.25 μM [ γ-32P] ATP, 10 % DMSO and indicated concentrations of KN-93, supplemented with 0.25 mM CaCl2 and 2 mM EGTA (for autophosphorylated samples) or 0.25 mM EGTA and 2 mM CaCl2 (for nonautophosphorylated samples ), total 100 μL ). The reaction is terminated by adding of 25 μL of 100 % ( w/v ) ice-cold TCA. After centrifugation, 80 μL of the supernatant is applied to phosphocellulose paper. The filters are then washed with 75 mM H3P04 for 15 min with continuous agitation. After 4-cycles of washing, the radioactivity retains on the filter paper is quantified in a liquid scintillation counter. |
| 体外活性 | 方法：KN-93（0,1,2,5,10μM）处理PCI2h细胞，并测量多巴胺含量。
结果：KN-93 以剂量依赖性方式降低了多巴胺 (DA) 含量。[3]
方法：KN-93（0-50 μM）处理人肝星状细胞 （LX-2），CCK-8 法检测细胞增殖，SDS-PAGE 和 Western blotting 检测两种细胞周期调节因子 p53 和 p21 的表达。
结果：KN-93 （5-50 μM） 以剂量依赖性方式降低人肝星状细胞的增殖，处理 24 小时后从 81.76% 降低到 27.15% ；10 μM的KN-93 孵育诱导细胞生长呈时间依赖性方式降低，从 8 h 的 78.27% 降低到 48 h 的 11.48%；细胞周期调节因子表达分析显示，KN-93 降低了 p53 和 p21 的表达。[5] |
| 体内活性 | 方法： 6-羟基多巴胺 （OHDA） 注射诱导大鼠 PD 模型，在左旋多巴治疗前，将成功病变的大鼠纹状体内给予不同剂量的 KN-93 （1 μg、2 μg 或 5 μg）。在 PD 大鼠中测量异常不自主运动 （AIM） 评分和阿扑吗啡诱导的旋转。通过 western blot 测定 GluR1 在 Serine-845 （pGluR1S845） 水平的磷酸化水平。通过实时聚合酶链反应 （PCR） 测量 Arc 和 Penk 水平。
结果： 2 μg 和 5 μg KN-93 治疗均降低了左旋多巴启动型 PD 大鼠的 AIM s 评分，而不影响左旋多巴的抗帕金森病作用；与行为分析一致，KN-93 （2 μg）治疗降低了 PD 大鼠的 pGluR1S845 水平，同时也 降低了 PD 大鼠 Gad1 和 Nur77 的表达。[1]
方法：KN-93（0.24mg/kg，腹膜内注射，每周三次）处理MRL/lpr Foxp3-GFP的 小鼠，收获淋巴器官，并测定 Foxp3 细胞的数量；从 MRL/lpr Foxp3-GFP 小鼠的脾脏中分离出幼稚 CD4 细胞，然后在 Treg 极化条件下进行体外培养，最后来确定其是否可以预防疾病发展。
结果：PBS 治疗小鼠的 Treg 细胞逐渐减少，而 KN-93 治疗小鼠的 Treg 细胞保持稳定且显著增高；在 KN-93 处理的小鼠的脾脏和外周淋巴结中发现 GFP 阳性细胞数量更多；当存在 KN-93 时，Treg 细胞的百分比更高，并且呈剂量依赖性。[2] |
| 存储条件 | Powder: -20°C for 3 years | In solvent: -80°C for 1 year | Shipping with blue ice. |
| 溶解度 | DMSO : 93 mg/mL (155.3 mM)
Ethanol : < 1 mg/mL (insoluble or slightly soluble)
H2O : 84 mg/mL (140.2 mM)
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| 关键字 | KN 93 Phosphate | KN93 Phosphate | KN-93 Phosphate |
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