抗体纯化试剂盒(Protein G法)

品名：Smart-antibody™ Protein G抗体纯化试剂盒，货号：P4144，品牌：Engibody

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

保姆级抗体纯化试剂盒（Protein G法）

Smart-antibody™
Protein G抗体纯化试剂盒的优势
 
1、本试剂盒可以纯化来自腹水，血清，细胞培养物上清等样本形式的抗体。
 
2、试剂盒中的Protein G纯化填料可以重复使用10次以上，偶联在琼脂糖珠上的Protein G是纯化人、大鼠、小鼠，山羊，绵羊IgG抗体（包含单克隆或多克隆）的理想选择，高特异性，高稳定性，高亲和力，低配基脱落。
 
3、本试剂盒是一个Complete All-In-One Kit — 包含全部试剂及耗材，高效结合缓冲液、平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、中和液、Protein G填料、重力空柱（带控流阀）、脱盐浓缩柱、抗体储存液、以及下游WB检测所需的高特异性山羊抗小鼠二抗（HRP标记）。

让抗体纯化变得简单高效！

第一部分：背景简介及应用场景
 
Protein A、Protein G与抗体的结合特性比较
 
1、Protein G Agarose Resin 6FF、rProtein G Agarose Resin 6FF与抗体的结合
 
链状球菌蛋白G，简称Protein G,是一种来自链状球菌的细胞壁蛋白。分子量约为25kDa。由白蛋白结合域 (ABD1, ABD2, ABD3)和免疫球蛋白结合域构成。与Protein A相似，Protein G可与IgG的Fc区特异性结合,但Protein G能够特异性结合的抗体种类更加广泛，对于非常见物种IgG的结合能力也比较好，血清蛋白结合水平更低，纯度也更高。重组protein G使用基因重组技术经E.coli发酵生产的重组链状球菌蛋白，人工除去了白蛋白结合域和细胞表面结合域，以减少非特异性结合，因此，它比天然Protein G和Protein A有更强大的亲和力。
 
蛋白G作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性，一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。
 
天然的Protein G有多个IgG结合结构域和白蛋白结合域。 
 
天然蛋白G大量结合IgG的同时，其非Fc结合域能结合部分杂蛋白，导致洗脱下来的IgG纯度不够，因此科学家利用基因工程的方法克隆Protein G的基因并进行改造，得到重组型蛋白G，其非特异性结合明显降低。重组的蛋白G经过改造后在C端加入了一个半胱氨酸，可以定点偶联到琼脂糖珠上，降低空间位阻的同时提高IgG的结合能力。一步亲和层析后样品纯度可超过95%。
 
但蛋白G与lgG的结合强度很大程度上依赖于该抗体的种属和亚型，而其动态结合能力则决定于结合强度(解离常数)及流质阻力等多种因素 (例如上样时样品在柱内的停留时间)。
 
本试剂盒中使用的即是优化重组的蛋白G (rProtein G)偶联的Agarose Resin 6FF
 
Protein A和Protein G各具特点。Protein G能够结合大多数哺乳动物的IgG, 且具有更高的亲和力(最适合人、大鼠、小鼠，山羊，绵羊的抗体纯化)，但却不能像protein A一样可以经受住严苛的洗脱条件。另外，蛋白G还能结合Fab段。
 
Engibody品牌Protein G填料的优势：
货号：P2709，品名：Protein G Agarose Resin 6FF
 
1、rProtein G经过了序列优化并进行了重组表达，Protein G与琼脂糖微球偶联时用的是氨基酸序列C末端最后一个半胱氨酸（基因工程改造得到的），因为半胱氨酸在蛋白序列中比较稀有，这样可以基本实现把Protein G定点定向偶联到agarose beads上，使得agarose beads上的Protein G分子均处于有效的空间构象，纯化效率和亲和力得到大大提升！
 
2、因其基质的耐压性（可耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的抗体的纯化。
 
Protein A和Protein G对不同种属和不同抗体亚型有不同的结合能力
需要根据这个表格来选择适合目的抗体的纯化填料
 
 
 

第二部分：技术原理
Protein G填料捕获抗体分子的微观示意图

Protein G结合抗体分子CH2结构域和CH3结构域的交界部位，还可以识别部分种类的Fab
 

第三部分：技术流程
 

第四部分：结果展示
 
小鼠抗体腹水经过Protein G琼脂糖填料纯化后的SDS-PAGE检测结果
Purification of mouse IgG using Protein G resin 6FF
 
High purity and high capacity of rProtein G 6FF resin.
 
5 mL mouse ascites fluid was loaded on the gravity flow column containing 0.5 mL settled rProtein G 6 FF resin. Bound immunoglobulin was eluted with elution buffer (Neutralization buffer was added before). Fractions were analyzed by SDS-PAGE.
 
Lanes: (1) Raw ascites fluid; (2) Flow-through; (3) Elution 1; (4) Elution 2.
 
Note that, heavy and light chains of IgG were mostly absent from the flow-through, indicating that most immunoglobulins were 
 

第五部分：抗体纯化试剂盒组分清单
（共计10个组分，均可单独购买）
 

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)