Protein A抗体纯化试剂盒

品名：Smart-antibody™ Protein A抗体纯化试剂盒，货号：P4143，品牌：Engibody

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

保姆级抗体纯化试剂盒（Protein A法）

Smart-antibody™
Protein A抗体纯化试剂盒的优势
 
1、本试剂盒可以纯化来自腹水，血清，细胞培养物上清等样本形式的抗体。
 
2、试剂盒中的Protein A纯化填料可以重复使用10次以上，偶联在琼脂糖珠上的Protein A是纯化人、兔、猪、狗或猫IgG（单克隆及多克隆）的理想选择，高特异性，高稳定性，高亲和力，低配基脱落。
 
3、本试剂盒是一个Complete All-In-One Kit — 包含全部试剂及耗材，高效结合缓冲液、平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、中和液、protein A填料、重力空柱（带控流阀）、脱盐浓缩柱、抗体储存液、以及下游WB检测所需的高特异性山羊抗兔二抗（HRP标记）。
 

第一部分：背景简介及应用场景
 
Protein A、Protein G与抗体的结合特性比较
 
1、Protein A Agarose Resin 6FF、rProtein A Agarose Resin 6FF与抗体的结合
 
目前，约70-80%的抗体纯化使用Protein A及Protein G亲和层析。蛋白A (Protein A)来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体lgG分子的Fc段特异性结合的结构域。蛋白A作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性，一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。
 
天然的Protein A有5个IgG结合结构域和未知功能的非Fc结合域，结构示意图如下：
 
此结构的蛋白A大量结合IgG的同时，其非Fc结合域能结合部分杂蛋白，导致洗脱下来的IgG纯度不够，因此科学家利用基因工程的方法克隆Protein A的基因并进行改造，得到重组型蛋白A，其非特异性结合明显降低。重组的蛋白A经过改造后在C端加入了一个半胱氨酸，可以定点偶联到琼脂糖珠上，降低空间位阻的同时提高IgG的结合能力。一步亲和层析后样品纯度可超过95%。
 
但蛋白A与lgG的结合强度很大程度上依赖于该抗体的种属和亚型，而其动态结合能力则决定于结合强度(解离常数)及流质阻力等多种因素(例如上样时样品在柱内的停留时间)。
本试剂盒中使用的即是优化重组的蛋白A (rProtein A)偶联的Agarose Resin 6FF
 
2、Protein G Agarose Resin 6FF与抗体的结合
 
蛋白G是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，为三型Fc受体。其通过类似于蛋白A的非免疫机制与抗体的Fc段结合。像蛋白A一样，蛋白G可以与IgG的Fc区域特异性结合，不同的是，Protein G可以更广泛、更强地结合更多类型的lgG, 同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也相对更低。此外，蛋白G还可以和某些抗体的Fab和F (ab)2段结合。
 
与蛋白G相比，蛋白A对兔、猪、狗和猫的IgG亚类提供了最高的结合能力。除IgG3外，蛋白A对人IgG也具有更高的结合能力，人IgG3结合较弱。另外，蛋白A与小鼠IgG1结合较弱，不推荐用于该抗体类型的大多数应用。

Engibody品牌Protein A填料的优势：
货号：P2108，品名：Protein A Agarose Resin 6FF
 
1、Protein A经过了序列优化并进行了重组表达，protein A与琼脂糖微球偶联时用的是氨基酸序列C末端最后一个半胱氨酸（基因工程改造得到的），因为半胱氨酸在蛋白序列中比较稀有，这样可以基本实现把protein A定点定向偶联到agarose beads上，使得agarose beads上的Protein A分子均处于有效的空间构象，纯化效率和亲和力得到大大提升！
 
2、因其基质的耐压性（可耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的抗体的纯化。
 
Protein A和Protein G对不同种属和不同抗体亚型有不同的结合能力
需要根据这个表格来选择适合目的抗体的纯化填料
 

第二部分：技术原理
 
Protein A填料捕获抗体分子的微观示意图

Protein A结合抗体分子CH2结构域和CH3结构域的交界部位
 

第三部分：技术流程

第四部分：结果展示
 
兔抗体血清经过Protein A琼脂糖填料纯化后的SDS-PAGE检测结果

 Purification of rabbit IgG using Protein A resin 6FF.
High purity and high capacity of Protein A resin 6FF.
 
5 mL rabbit serum was loaded on the column containing 0.5 mL settled Protein A resin 6FF. Bound immunoglobulin species were eluted with elution buffer (Neutralization buffer was added before). Fractions were analyzed by SDS-PAGE.
 
Lanes: (1) Raw rabbit serum; (2) Flow-through; (3) Elution. Note that, heavy and light chains of IgG were mostly absent from the flow-through, indicating that most immunoglobulins were bound to the column.

 

第五部分：抗体纯化试剂盒组分清单
（共计10个组分，均可单独购买）
 

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)