品名：Smart-EMSA™ EMSA Kit，货号：IF9501，品牌：Engibody
订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的EMSA试剂盒！
Smart-EMSA™凝胶迁移实验试剂盒
EMSA技术的现状分析
EMSA实验所需试剂较多，一些试剂如Poly（dl-dC）还需进口，加上生物素探针的合成和标记、蛋白样本的制备、EMSA凝胶的配制、带正电荷的尼龙膜、EMSA专用电泳液和EMSA专用转膜液等，费用不小。还需要一些设备如电泳仪与转膜仪、紫外交联仪、化学发光成像仪等。
从市场逐个购买试剂，费时费力，费用不菲，且试剂与试剂之间难以协调匹配，遇到各种技术问题也无法解决。
有了复名表观遗传学的EMSA试剂盒，这些问题全部迎刃而解，最小的费用和时间搞定EMSA实验。
而且实验者跟随本EMSA试剂盒操作步骤可熟悉与掌握该项技术，节约很多时间和费用，遇到问题可以找复名表观遗传学技术支持轻松解决，文末有技术支持的微信二维码，可以随时添加好友。
Smart-EMSA™ 试剂盒的4大优势
1、本试剂盒适用于贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织、植物组织及纯化后的重组蛋白，是个真正的多合一Kit。
2、本试剂盒包含适用于验证型EMSA、竞争型EMSA及SuperShift超迁移EMSA的试剂。
3、本试剂盒采用化学发光法检测，而非采用放射性同位素检测，具有高灵敏度，且对实验人员健康无任何伤害。
4、本说明书是一本EMSA实验的全面技术手册，透彻分析了EMSA实验中的重点、难点，对各种重点难点问题都有针对性的解决方案。同时包含了表观遗传学的基础知识和基本脉络，汇总了DNA与各种蛋白互作的详细信息。看完这本保姆级说明书，所有疑难都会迎刃而解，EMSA尽在掌握之中。
一盒在手，EMSA无忧！
第一部分：背景简介及应用场景
EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay），凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率改变实验，其原理是蛋白-核酸探针复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳中比自由探针迁移更慢，是一种用于体外In Vitro检测蛋白（主要是转录因子及转录辅因子）与DNA片段（启动子或增强子）相互作用的技术。
1、EMSA和ChIP、DNA Pull-down、DAP-seq，这四种研究DNA-蛋白互作技术的内在区别是什么？
1)、EMSA———电泳凝胶迁移阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay)，In Vitro体外通过DNA探针检测目的蛋白，反向验证了ChIP。是经典方法。
2)、ChIP———染色质免疫沉淀技术是一种用于在细胞天然染色质背景下In Vivo体内探测蛋白质-DNA 相互作用的技术。这种方法可以用于检测特定转录因子与基因组某个启动子元件的结合水平，也可以用于检测整个基因组范围内位点上某种特定组蛋白修饰水平。
3)、DNA Pull-down———In Vitro体外通过DNA探针捕获目的蛋白或其他候选蛋白，获取蛋白后进行WB检测或MS质谱鉴定。也是经典方法。
4)、DAP-seq———DNA亲和纯化测序，使用表达纯化得到的重组靶蛋白（例如重组转录因子）捕获样本中与之相结合的所有genomic DNA片段，本质上可以理解为In Vitro体外 ChIP，适用于没有合适ChIP抗体的情况，同时这种技术的另一个独特优势是可以在全基因组范围内Genome wide快速筛选得到可能和靶蛋白相结合的全部基因组DNA片段。这是近年来的新兴技术。
2、EMSA和ChIP的联合分析，相互验证
这是经典研究策略，ChIP是体内In Vivo研究DNA和蛋白互作，EMSA是体外In Vitro进行DNA和蛋白互作的验证，互相印证。
第二部分：技术原理和技术流程
技术原理：
当DNA探针与蛋白样本混合孵育时，样本中可以与DNA探针结合的蛋白与探针形成蛋白-探针复合物，这种复合物由于分子量很大，在进行PAGE电泳时迁移较慢，而没有结合蛋白的自由DNA探针则迁移较快，跑在凝胶的前沿。孵育的样本在进行PAGE电泳分离并转膜（正电荷尼龙膜）后，蛋白-探针复合物会在膜靠前的自由探针位置后方再形成一条目的条带，说明有蛋白与目标探针（例如转录因子和启动子DNA元件的结合）发生了互作。
技术流程：
根据实验者研究的靶标蛋白类型不同，采用3种略有不同的技术流程
1、验证型EMSA
如果样本是纯化后的重组蛋白（例如转录因子，转录因子和启动子DNA元件的结合一般是弱结合，容易解离，且转录因子在细胞内的丰度很低，建议采用表达纯化的高纯度转录因子作为转录因子类EMSA的蛋白样本），没有其他杂蛋白的干扰，只需要设计含有阴性对照的最简单的实验方案即可。
2、竞争型EMSA
如果样本是细胞核蛋白提取物，样本里除了目的蛋白，还有很多其他各种蛋白，容易和DNA探针发生非特异性结合，这时就需要设计野生型冷探针竞争对照组和突变型冷探针竞争对照组来排除非特异性结合。
3、SuperShift超迁移EMSA
如果还想对目的蛋白进行进一步确定，可以在蛋白样本中加入探针及靶标蛋白的抗体，形成三元复合物，这样电泳迁移率进一步变慢，得到超迁移条带。
下图为SuperShift超迁移EMSA的示意图
第四部分：EMSA实验结果与示例展示
展示5个结果示例，如下列图片所示：
EMSA assay of the binding of NAC075 to the CAT2 promoter
EMSA assay of the binding of MaWRKY26 to the MaLOX2 probe
The EMSA assay showing direct binding of nuclear proteins to FTO promoter sequence using nuclear extract from HEK 293 cells (lane 1, 2). The competition assay was carried out by adding mutanted probes (lane 3, 4) or 100×unlabeled double-stranded oligonucleotide probes (lane 5, 6). The super-shift assay conducted using 20 ng anti-Foxa2 antibody (lane 7, 8). Each group was replicated with two lanes. The arrows indicate the probes, DNA-protein complexes and shift band.
EMSA assay of the binding of SRY to the probe
EMSA demonstrating specific NrtR binding to DNA. DNA fragments used in the assays are defined by their genomic positions and are shown as dark circles in the top of each panel. (A) EMSA with nadM-nadV DNA fragment (0.7 ng) in the absence (lane 1) and in the presence (lanes 2–5) of increasing syNrtR protein concentrations (0.25, 0.5, 1.0 and 5.0 nM, respectively). The specificity of interaction of syNrtR (2 nM) with DNA fragment (lane 7) was tested by competition with 1 μg polydC/dI (lane 8) and 140 ng unlabeled DNA fragment (lane 9). Lane 6 contains 0.7 ng of the biotylinated DNA fragment only. (B) EMSA with nadE and nadA DNA fragments in the absence (lanes 1 and 5) and in the presence of syNrtR (2 nM) (lanes 2 and 6). The specificity of interaction was tested with polydC/dI (lanes 3 and 7) and unlabeled DNA fragment (lanes 4 and 8). (C) EMSA with prs-nadV DNA fragment in the absence (lane 1) and in the presence of 2 nM soNrtR (lanes 2 and 5) and 5 nM soNrtR (lane 6). Competition assays were performed with 2 nM soNrtR in the presence of polydC/dI (lane 3) and unlabeled DNA (lane 4).
第五部分：EMSA试剂盒组分清单
（共计14个组分，均可单独购买）
| 编号 | 组分名称 | 数量 | 保存 | 注意事项 |
| 下列组分收到后需储存在 4 °C中。 |
| EMSA-001 | 10×蛋白与探针结合反应液 | 1 mL | +4 °C |
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| EMSA-002 | EMSA专用封闭液 | 120 mL | +4 °C |
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| EMSA-003 | EMSA专用10×洗涤液 | 250 mL | +4 °C |
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| EMSA-004 | 检测反应液 | 120 mL | +4 °C |
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| EMSA-005 | ECL发光液A液(IF6747) | 50 mL | +4 °C |
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| EMSA-006 | ECL发光液B液(IF6747) | 50 mL | +4 °C |
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| 下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中 |
| EMSA-008 | Poly (dI•dC) | 125μL | -20 °C |
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| EMSA-009 | EMSA专用Loading Buffer（5×） | 3*1 mL | -20 °C | 室温融化后使用 |
| EMSA-010 | Streptavidin Conjugated HRP | 100 µL | -20 °C |
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| EMSA-011 | 50% Glycerol | 500 μL | -20 °C |
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| EMSA-012 | 1% NP-40 | 500 μL | -20 °C |
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| EMSA-013 | 1 M KCl | 1 mL | -20 °C |
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| EMSA-014 | 100mM MgCl2 | 500 μL | -20 °C |
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| EMSA-015 | 200mM EDTA (pH 8.0) | 500 μL | -20 °C |
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Smart-EMSA™保姆级凝胶迁移实验试剂盒，官网页面：
https://www.engibody.com/products/Smart-EMSA-EMSA-Kit.html
订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
