小鼠IL-4 ELISPOT试剂盒

Mouse IL-4 ELISPOT Kit

组分（Materials Provided）

背景（Background）

众所周知，IL-4是典型的调节性细胞因子，在大量的免疫和非免疫功能中发挥作用。这种细胞因子通常由2型辅助T（TH2）细胞和滤泡辅助T（TFH）细胞在抗原致敏后分泌。小鼠IL-4 ELISpot测定法设计用于在单细胞水平检测小鼠IL-4分泌细胞，可用于定量小鼠IL-4释放细胞的频率。ELISpot检测具有高度的可重复性和敏感性，可用于测量频率远低于十万分之一的反应。ELISpot检测不需要预先体外扩增T细胞，它们适用于仅使用少量原代细胞的高通量分析。因此，ELISpot检测是疫苗开发、细胞因子分泌和监测各种临床试验的有用工具。

应用说明（Application）

该试剂盒用于在细胞水平检测小鼠IL-4。

该产品仅用于科研。

重构方法（Reconstitution）

复溶说明和具体浓度详见分析证书。

存储（Storage）

1.未开封的试剂盒应在2℃-8℃条件下储存。

2.在外包装上找到有效期，不要使用超过有效期的试剂。

3.打开后请尽快用完。

原理（Assay Principles）

ELISpot检测采用定量夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）技术。该试剂盒由预包被的抗IL-4抗体微孔板、阳性刺激物、生物素抗IL-14抗体、链霉抗生物素蛋白-HRP、AEC和缓冲液组成。

您的实验将包括6个简单步骤：

a） 一种针对小鼠IL-4的单克隆抗体已被预涂到聚偏二氟乙烯（PVDF）背衬的微孔板上。

b） 将适当刺激的细胞移入孔中，将微孔板放入37°C的加湿CO2培养箱中一段时间。在此潜伏期内，分泌细胞附近的固定抗体结合分泌的IL-4。

c） 在洗掉任何细胞和未结合的物质后，将对小鼠IL-4特异性的生物素化抗体加入孔中。在洗涤以去除任何未结合的生物素化抗体后，加入与链霉抗生物素蛋白结合的HRP。

d） 清洗平板，向平板中加入用稀释缓冲液稀释的链霉抗生物素-HRP。

e） 清洗盘子并添加AEC。红棕色沉淀在细胞因子定位部位形成并表现为斑点，每个斑点代表一个分泌IL-4的细胞。

f） 斑点可以用自动ELISpot阅读器系统或使用立体显微镜手动计数。