小鼠肿瘤抗原特异性T细胞检测试剂盒

中文名称：

小鼠肿瘤抗原特异性T细胞检测试剂盒

品牌：

ESMDT

产地：

苏州

保存条件：

冷冻干燥保存，-20 ℃ 至 -80℃, （本品只适用于小鼠样本的检测）

产品类别：

小鼠肿瘤抗原特异性T细胞检测试

数量：

999

保质期：

1年

检测方法：

（1）在细胞培养皿或者细胞培养板各孔中加入待检测细胞和相应的培养基，细胞浓度0.8×106-2×106个细胞/mL, 考虑到细胞损 失和流式细胞术检测的准确性，建议至少使用100万个细胞以上，建议使用12孔板或者24孔板培养，至少使用1-2mL以上培养基。 （2）向其中加入使用PBS或者相应培养基重悬后的纳米粒子，本检测试剂盒中检测纳米粒子使用终浓度为0.5mg/mL-1.0mg/mL. （3）纳米粒子与待检测细胞共孵育32-48小时。建议待检测样本设置至少两个重复；需要设置阴性对照和阳性对照。 （4）在培养基中加入Brefeldin A Solution (BFA) (1000 × 稀释到细胞培养基中)，共孵育4小时。 （5）使用移液器吹打收集培养基中的悬浮细胞，收集完细胞后将样品细胞在400-500g离心5分钟，弃去上清液后收集细胞。 （6）收集完细胞后将样品细胞重悬于 1 mL PBS 中。 （7）除空白对照之外，每个样品加入2μL活死细胞染料标记活细胞和死细胞，混合均匀，冰上避光孵育15-30 min 。 （8）孵育完毕后，400-500g离心5 min ，用100 μL FACS buffer 重悬细胞。 （9）除空白对照之外。每个样品中加 2μL Fc Block封闭免疫细胞表面的Fc受体，混匀后冰上孵育5 min。 （10）孵育完毕后，每管加入相应的不同荧光染料标记的膜标记抗体（CD3抗体，CD4抗体，CD8抗体），冰上孵育15-30min。 （11）直接加入 500μL 4%多聚甲醛固定细胞，冰上孵育40-60min。 （12） 400-500g 离心5min，弃去上清液，然后加100μL 破膜剂重悬细胞，冰上孵育30min。 （13）孵育完毕后，每管加入相应的荧光染料标记的IFN-�抗体和/或颗粒酶B（GzmB）抗体，冰上孵育30 min。 （14） 400-500g 离心5min，弃去上清后用200μL FACS buffer 重悬细胞或者使用500μL 4%多聚甲醛固定细胞，冰上孵育40- 60min后再检测。 （15）使用流式细胞术检测所标记抗体为阳性的细胞的比例。（注：上机检测过400目滤布之后再检测）。 （16）使用流式细胞术分析软件分析活细胞中的CD3+IFN-�+ 、CD3+CD4+IFN-�+和CD3+CD8+IFN-�+的T细胞占相应细胞的比例， 即为肿瘤抗原特异性T细胞的比例和含量（细胞越多检测越准确。建议检测时活细胞收取数大于10万，最好收集的活细胞数大 于20万）。

反应性：

无