产品名称:灰霉菌PCR试剂盒
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本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物等组分经过优化,灵敏度高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据高度保守区设计,不会跟其他的DNA/RNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6.本产品足够50次20μL体系的染料法荧光定量PCR反应。
包装规格及成分(具体信息详见说明书):
灰霉菌PCR试剂盒的制备
1. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取反应,多出的两个中一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 牛乳头瘤病毒 PCR 阳性对照(1×10E6 拷贝/μL,本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
2. 用自选方法纯化上述 N+2 个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。
电泳分析
1. 取 5-10uL 扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用 1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
2. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为 200bp 左右。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或 PCR 阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。
3. 如果所有样品和 PCR 阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂、设备、程序、操作等),需要重复并排查原因。
4. 如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2 个样品中有扩增产物的判定为阳性,无则判定为阴性。
灰霉菌PCR试剂盒样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限一年。阳性对照需单独放置,不要污染其他试剂。
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
4、自备试剂:样品DNA。
灰霉菌PCR试剂盒注意事项:
1 所有操作严格按照说明书进行;
2试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;
3 反应液应避光保存;
4反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
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