人肥大细胞HMC-1

HMC-1 人肥大细胞 一、细胞基本属性 细胞名称 HMC-1 人肥大细胞 细胞别称 HMC-1  种属来源 人 生长特性 悬浮生长 细胞形态 淋巴母细胞样 简介 来源于一名 52 岁男性肥大细胞白血病患者的外周血样本。该细胞有多重亚型分别 为：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。广泛用于人肥大细胞功能研究，因为它们 表现出组织肥大细胞的许多关键特征，例如组胺、类胰蛋白酶、肝素和类似细胞表 面抗原谱的表达 （1,2）。受体酪氨酸激酶 KIT 在肥大细胞上表达，在肥大细胞 的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突变与肥大细胞生长失调有关， 并与肥大细胞肿瘤和系统性肥大细胞增多症有关。据报道，HMC-1 细胞系中存在两 个 KIT 激活点突变 。这两种突变都将受体转化为组成型酪氨酸磷酸化和活性状态 ，导致生长因子非依赖性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1 （560,816））是HMC-1 细胞系的两个变异亚系。HMC-1.1 具有 V560G 突变，但不 具有 D816V 突变。HMC-1.2 同时具有 V560G 和D816V 突变，并且表现出比 HMC- 1.1 更高的增殖率。有人认为，HMC-1.2 的较高增殖潜力可能归因于 D816V 突变 。 生物安全等级 1 细胞规格 1×10 6cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 支原体检测 无 培养基 准备 IMDM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 培养条件 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ 冻存条件 无血清冻存液，液氮储存 细胞接收后的处 理 1）收到细胞后，75%酒精消毒15ml离心管，若发现有破损、有液溢出及 细胞有污染，请拍照后及时联系我们。 2）离心管直接在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基 重悬细胞后，根据离心后的沉淀量进行传代，转移至T25培养瓶中后，请 在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20× ）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的 依据。 3）悬浮细胞：传代时使用【半换液法】对细胞状态有利，因此我库建议 您使用【半换液法】进行传代，刚收到细胞时建议1:2传代较为合适。将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含8mL完全培 养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。 然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下 观察细胞生长情况和细胞密度。 如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 对于悬浮细胞传代可以参考以下方法： 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法【半换液法】： 悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般 情况下细胞密度维持在1×10 5~1×10 6个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正 常生长。 【离心换液法】： 如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培 养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配 置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 1） 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面 T25瓶为例； 1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数， 来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10 6~1×10 7个活细胞/ml. 2. 1000rpm离心5min，去掉上清。用无血清细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1× 10 6~1×10 7个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、 日期等信息。 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同 时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 三．细胞出现问题，予以重发情况： 1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2. 细胞污染问题，请在收到产品3 天内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发； 3. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后，绝大多数细胞未存活，（需提 供真实清晰的细胞状态照片），重发； 4. 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封，出现污染，重发； 5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力， 和每天的细胞照片，核实后予重发； 6. 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到 细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤，并跟技术人员沟通的，由技术 人员判定为我方责任的，重发。 四、细胞出现问题，不予以重发的情况： 1. 客户操作造成细胞污染，不重发； 2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片，不重发； 5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6. 收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的，不重发； 7. 视具体情况而定 注意事项： 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护， 所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液 氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹 掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。