U-Ch1人骶骨脊索瘤细胞

                           U-Ch1人骶骨脊索瘤细胞 百欧博伟生物 细胞系

细胞简介

平台编号：Bio-54245

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：U-Ch1

细胞名称：人骶骨脊索瘤细胞

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

细胞介绍

U-CH1 是一种间充质样细胞系，于 1998 年从一名 56 岁白人男性脊索瘤患者的骶骨中分离出来。该细胞系是根据初次手术 4 年后放疗后骶尾部局部复发建立的。脊索瘤是一种罕见的生长缓慢的肿瘤类型，U-CH1是一种生长相对缓慢的细胞系。U-CH1具有由浆细胞和粘液性细胞间质组成的异质形态，代表典型的脊索瘤特征。这些细胞过度表达转录因子 T (Brachyury)，这是脊索瘤最特异的标志物。

细胞特性

1）来源： 56岁白人男性脊索瘤患者的骶骨

2）形态：间充质样，具有可变液泡（长梭形 不规则形状）贴壁生长

3）含量：>1x106  细胞数

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5) 用途：仅供科研使用。

细胞的运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理方法

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                      

细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备

1） 准备IMDM加RPMI-1640(4:1) 培养基；优质胎牛血清，10%； 1 % L-谷氨酰胺；双抗，1%。

注意：

1、使用大鼠尾 I 型胶原蛋白（BD Biosciences，目录号 354236）稀释至 50 μg/ml。将 2-3 ml 包被缓冲液加入烧瓶中，并在室温下孵育一小时或者使用细胞包被工作液（推荐iCell-8280）。小心吸出剩余溶液。使用 1x DPBS 冲洗烧瓶 2 次以去除酸。涂层烧瓶可立即使用，或在无菌条件下于 2-8 ℃保存长达一周。

2、该细胞生长缓慢。倍增时间1周多，发货估计3-4周 左右。  

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理

1）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化直至细胞层分散（通常在 5 至 15 分钟内）以使培养基达到正常 pH 值（7.0 至 7.6），然后在显微镜下观察细胞消化情况，为避免结块，在等待细胞分离时请勿敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。难以分离的细胞可置于37°C以利于分散。若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

下面T25瓶为例；

1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！