活性氧（Reactive oxygen species, ROS）荧光指示剂氨基苯基荧光素（APF）和羟苯基荧光素（HPF）

产品简介

氨基苯基荧光素（APF）和羟苯基荧光素（HPF）是由T. Nagano开发的两种活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示剂，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更优秀的特异性和稳定性。APF和HPF显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。APF和HPF具细胞膜渗透性，本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氯酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em，~490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。

APF和HPF产生的荧光相对于其他活性氧探针比如DCFH弱很多，这是探针本身的特性决定的(见附表1活性氧探针(HPF,APF, DCFH)对各种活性氧物质的反应特异性)。

本品以粉末形式提供，可直接溶于无水DMSO配制成10mM储存液，常用工作浓度范围1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

基本特性

CAS：359010-70-1

同义名：3'-(p-aminophenyl) fluorescein氨基苯基荧光素

分子式： C26H17NO5

分子量：423.42

纯度：≥95%

Ex/Em：:492/515nm

溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

储存条件：-20℃干燥保存，2年有效。

使用方法（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

一、储存液制备

将低温保存的1mg粉末置于室温回温至少20min，之后加入471μl 无水DMF配置成5mM储存液。充分溶解和混匀后，按照单次用量分装，-20ºC避光干燥保存，避免反复冻融。

【注】：APF能溶于DMSO（10mM），但有数据显示DMSO是羟基自由基的淬灭剂，会干扰检测和降低灵敏性。因此，建议用DMF作为溶剂。

二、溶液体系检测

正式实验前，取一管APF储存液置于室温回温，使其充分融解。之后用合适的缓冲液（比如HHBS缓冲液，PBS缓冲液）稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

三、细胞体系检测

以下实验步骤仅做参考，最佳的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入APF工作液之前按需处理细胞。

1）根据具体用量，将DMF储存液用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液稀释成1-10μM工作液。

2）根据实验设计处理细胞（比如，RASM细胞用50-100nM 血管紧张素II处理3-5h）。

3）取步骤1）准备的1-10μM工作液加入细胞，37ºC孵育20-60min。

4）吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理缓冲液替换。

5）用合适的荧光仪器（Ex/Em=492/515nm）来检测。

【注1】：BSA和酚红会影响荧光，需谨慎使用。

【注2】：HPF和APF能用于溶液体系或胞内ROS检测。

附表1活性氧探针(HPF, APF, DCFH)对各种活性氧物质的反应特异性

注意事项

（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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