柠檬酸合酶(CS)测定试剂盒/分光光度法25管/12样 新品

柠檬酸合酶(CS)测定试剂盒/分光光度法25管/12样

测定意义：

CS（ EC 2.3.3.1 ）廣泛存在於動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中，是三羧酸迴圈第一個限速酶，是三羧酸迴圈主要調控位點之一。

测定原理：

CS 催化乙醯 CoA 和草醯乙酸產生檸檬醯輔酶 A ，進一步水解產生檸檬酸 ；該反應促使無色的 DTNB 轉變成黃色的 TNB ，在 412nm 處有特徵吸光值。

自备仪器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水。

测定步骤：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 412nm ，蒸餾水調零。

2、樣本測定

（ 1 ）在試劑五中加入 1.2mL 無水乙醇和 26mL 試劑四，混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）孵育 5min ；用不完的試劑分裝後-20℃保存，禁止反復凍融；

（ 2 ）測定管：在 EP 管中加入 40μL 樣本、880 μL 試劑五和 40μL 試劑六，混勻，37℃反應 15min 後立即測定吸光值 A1。

（ 3 ）對照管：在 EP 管中加入 40μL 樣本、880 μL 試劑四和 40μL 試劑六，混勻，37℃反應 15min 後立即測定吸光值 A2。

（ 4 ）計算ΔA=A1-A2 ，每個測定管設一個對照管。

注 意：

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。