线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)活性试剂盒微板法/96样 新品

线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)活性试剂盒微板法/96样

产品简介：

线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶（mt-GPD）存在于线粒体中，在 3-磷酸甘油途径中起重要作用 ，催化底物 3-磷酸甘油生成磷酸二羟丙酮，同时生成的电子和氢进入呼吸链参与氧化磷酸化；在电子传递体（PMS）存在下，使噻唑蓝（MTT）还原生成蓝色产物，通过检测该蓝色产物在  550nm 处的增加速率，即可得出  mt-GPD 活性大小。

试剂盒组成和配制：

所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。

线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶（mtGPD）活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

样本制备：
线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：

① 称取约 0.1g 组织或收集  500 万细菌/细胞，加入  1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵氮研磨。 匀浆，转移至离心管后于 4℃×700g 离心  10min。
② 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心  10min。用移液器移除上清液(上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的酶活性（此步可选做）)，留下沉淀（沉淀即为线粒体）。

③ 在沉淀（线粒体）中加入 200μL 试剂二和 2μL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或先收集细菌/真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌/真菌加入1mL 提取液；冰

浴超声波破碎细菌/真菌（冰浴，功率  20％或  200W，超声  3s，间隔  10s，重复  30  次）；12000rpm， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

[注]：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为  1 ：5~10 的比例进行提取，或按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为  500~1000： 1  的比例进行提取。