中文名：大肠杆菌 Poly(A) 聚合酶
英文名：E. coli Poly(A) Polymerase
纯度：医药级
货号：E406458
包装：100u
存储温度：-20°C储存
产品介绍：
产品描述
通过加尾酶在mRNA 3' 末端引入Poly A尾，可增加mRNA的稳定性，增加mRNA翻译效率。使用加尾酶引入的Poly A尾的优势是简便易行，避免在质粒构建时引入过多的连续T碱基造成的质粒不稳定等问题。
E. coli Poly (A) Polymerase 不依赖模板的存在，可以催化 ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端，即在 RNA 的 3´末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率，可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。Poly (A)结构有助于提高 mRNA 的翻译效率。
本制品利用大肠杆菌大规模发酵表达，采用药用规格原辅料生产，并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等，符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。
质量要求
| 项目 | 标准 | 方法 | | 外观 | 澄明液体 | 目视检查 | | 可见异物 | 符合规定 | 中国药典2020版第四部第一法灯检法(通则0904) | | pH值 | 7.0-8.0 | 中国药典2020版第四部pH值测定法(通则0631) | | 活性 | 4.9KUml-5.1KU/ml | 加尾修饰及效率测定法 | | 纯度 | ≥95% | 中国药典2020版第四部高效液相色谱法(通则0512) | | 核酸内切酶残留 | 004-DNA 的降解不超过10% | SU酶与004-DNA.37C孵育3h | | 核酸外切酶残留 | 019 HindⅢ-DNA的降解不超过10% | SU酶与019 HindⅢ-DNA,37°C孵育3h | | RNA酶残留 | 293-RNA的降解不超过10% | 5U酶与293-RNA.37°C孵育1h | | 细菌内毒素含量 | ≤10 EU/mg | 中国药典2020版第四部凝胶限度试验法(通则1143) | | 宿主DNA残留 | ≤100 pg/mg | 荧光定量PCR法 | | 宿主蛋白残留 | ≤50 ppm | 中国药典2020版第四部菌体蛋白残留量测定法(通则 3412) | | 支原体 | 阴性 | 支原体检测试剂盒 | | 重金属残留 | ≤10 ppm | 中国药典2020版第四部重金属检查法(通则0821) |
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遵循以下规范生产
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2. 《GMP 附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。
3. 《人用基因治疗总论-中国药典 2020》国家药典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于细胞治疗，基因治疗和组织工程产品中的辅料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 细胞治疗产品生产过程中细胞因子和生长因子。
6.Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生产细胞或基因治疗药物的生物来源原料。
产品用途
1. 用于 RNA 3´末端标记。
2. 为 RNA 添加 Poly(A)尾，用于克隆或亲和纯化。比如将 miRNA 添加 Poly (A)，为 cDNA 合成提供 oligo-dT 引物结合位点。
3. 提高 RNA 在真核细胞中的翻译效率。
保存体系
20mM Tris-HCl; 300mM NaCl; 1mM DTT; 1mM EDTA; 0.1%TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol, pH7.5。
应用实例
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完整mRNA在细胞内表达GFP蛋白，加帽酶与帽类似物对比
注意事项
1. 热失活条件：65℃，20 min。
2. 该酶只能以 RNA 为底物。
3. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性，并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A)。
4. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液，也可以进行反应。
5. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性。
6. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响，不同的实验需要加 A 的量会有所不同，可通过减少反应时间来调整加 A 的长度，该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约 30 个 A 碱基，1 小时可加约 100 个 A 碱基。
7. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应，可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM，或直接对其进行纯化。
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大肠杆菌 Poly(A) 聚合酶;E. coli Poly(A) Polymerase
