抗体快速酶切F(ab′)2制备试剂盒抗体消化

产品名称

抗体快速酶切F(ab′)2制备试剂盒

产品货号

ZXLFAB-1100A

包装规格

1次/盒(0.5mgIgG/次)

预期用途

适用于人、兔、小鼠和其他物种和亚类的IgG酶切,得到F(ab')₂ 的片段。适用于化学发光、Elisa、免疫印迹(WB)、免疫组化、细胞学、单分子等免疫检测系统中灵敏度、稳定性、干扰、相关性等问题改善。

原理

本试剂盒采用高活性的胃蛋白酶活化物质,结合简约高效的滤过装置,选择性酶切人、兔、小鼠和其他物种和亚类的 IgG的 Fc 部分,得到保留抗原结合活性的 F(ab')2 的片段。

主要组成成分

(1)R1试剂:抗体稀释处理剂      1支

(2)R2试剂:抗体酶切缓冲液      1支

(3)R3试剂:胃蛋白酶活化物质    1支

(4)R4试剂:胃蛋白酶溶解液      1支

(5)R5试剂:酶切终止缓冲液      1瓶

(6)M1设备:滤过浓缩管    1支

下列试剂或仪器标记操作时需要,但不包含在本试剂盒中:

(1)移液器:10μL、200μL、1mL

(2)37±1℃水浴锅或培养箱

(3)震荡仪

(4)离心机

储存条件及有效期

(1)储存有效期:2~8℃条件下,有效期为12个月;

(2)R3试剂≤ -20℃保存;

(3)生产日期和使用期限:详见产品外包装标签。

方法和步骤

(1)实验前准备

1)请仔细阅读本说明书,本试剂盒可进行1次标记实验,每次标记实验的 标记量为0.5mg,可接受标记量为0.5-1mg。

2)将处于冷冻或冷藏状态的试剂盒组分提前恢复室温。

3)将R3试剂进行瞬时离心以确保固体物处于管底。

4)请打开水浴锅或培养箱,并设置工作温度为37±1℃。

5)滤过浓缩管加入0.5mL纯化水,8000 g离心5min润洗一次,收集管和滤芯内残留的纯化水倒入废液桶。

(2)标准操作方法

1)取0.5mg抗体至反应管,使用抗体稀释处理剂定容至0.5mL。

注意:如果抗体>0.5mg,仍是定容至0.5mL

2)使用移液器加入25 μL抗体酶切缓冲液,轻轻吹打或振荡混匀。

3)将R3试剂使用R4试剂溶解,震荡混匀后立即取2μL加入步骤2)中,轻轻吹打混匀;

4)用封口膜将反应管密封并置37℃±1℃孵育40min;

5)孵育结束加入30 μL酶切终止缓冲液,轻轻吹打混匀;

6)反应管内所有的液体转移至滤过浓缩管,8000 g离心5min,弃废液,滤过浓缩管内加入300 μL R1试剂,轻轻吹打混匀、离心;重复该步骤3次;

7)使用移液器连续轻轻吹打20次以充分回收标记物。将滤过浓缩管内溶液全部转移至冻存管内。此回收溶液即为酶切后的 F(ab')2 片段溶液,可根据需要进行下一步实验应用或保存。

常见问题解释

(1)哪些抗体可以使用本试剂盒进行酶切处理?

人、兔、小鼠和其他物种和亚类的 IgG。

满足以上两个条件的蛋白均能使用本试剂盒标记。若待标记物不满足以上条件,请选择本公司其他规格的标记试剂盒。

(2)本试剂盒可酶切处理多少mg抗体?

本试剂盒可进行1次酶切实验,每次酶切实验的 抗体量为0.5mg。可接受的酶切抗体量为0.5-1mg。如果需要酶切的抗体量更大,请选择本公司其他规格的酶切试剂盒。

(3)本试剂盒标记后的蛋白储存条件?

长期保存≤-20℃;短时间内(≤7天)2-8℃保存。如有需要,请选择本公司推荐的蛋白保存液。

(4)本试剂盒酶切后F(ab')2 的片段纯化效果如何?

首先,经本公司验证,按说明书操作后抗体IgG可完全被酶切消化,因此酶切产物中IgG可忽略不计。酶切产物包括F(ab')2 片段、大量 Fc小肽片段和少许的胃蛋白酶,其中通过滤过装置处理后,大量 Fc小肽片段和少许的胃蛋白酶可被大部分去除,得到纯度较高的F(ab')2 片段。如果酶切的抗体量比较大的、条件允许的情况下,建议使用凝胶纯化系统进行纯化。

(5)如有其他问题请联系本公司技术支持。

注意事项

(1)使用前请仔细阅读本说明书。如有疑问请先与技术支持确认后开始实验。

(2)请在通风良好的实验室内使用本试剂盒。

(3)使用本试剂盒进行实验产生的废液请及时密封、处理。

(4)本试剂盒供科学研究领域的专业人员使用。

(5)本试剂盒仅供实验室研究使用,不得用于临床诊断或临床ZL,不得用于食品或药品,不得储存在普通民房住宅内。

(6)使用本试剂盒时,请穿实验服并佩戴口罩和一次性手套。

基本信息

无锡子晓生物科技有限公司

Wuxi ZIJOY Biotechnology Co., Ltd

地址:无锡市惠山区智慧路1号4号楼

技术支持:2076028640@qq.com

订货热线:17200902831

*本试剂盒仅供实验室研究使用!

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