小牛胸腺DNA

小牛胸腺，鱼类精子和植物种子的胚等含有丰富的DNA，可作为提取DNA的良好材料。动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠溶液），但在0.14mol/L盐溶液中的溶解度很低，而核糖核蛋白（RNP）则溶于0.14mol/L盐溶液中，利用这一性质可将脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白以及其他杂质分开。制备方法1.取新鲜（或冰冻）的小牛胸腺，除去血水和结缔组织，在冰浴上切成小块，称取20g，加入2倍体积的0.1mol/L氯化钠-0.05mol/L，pH=7.0柠檬酸钠缓冲溶液，于组织捣碎机上高速匀浆5分钟。2.组织糜用转速为;3000r/min的离心机离心15分钟，将沉淀用50mL上述缓冲溶液洗涤2次，洗涤时用匀浆器研磨洗涤，每次如前离心。3.向后得到的细胞核沉淀中加入6倍体积的10%氯化钠溶液，充分搅匀置冰箱中过夜，以充分提取DNP，溶液为粘稠状。4.将所得的半透明粘稠状液体，用滴管慢慢注入冷蒸馏水中，边加边轻轻搅动（NaCl的终浓度为0.14mol/L），这时有白色丝状物——核蛋白析出，在冰箱中静置数小时，收集沉淀。5.将沉淀物再溶于4倍体积的10%氯化钠溶液中，迅速搅拌以加速溶解。加入1/2体积的氯仿-异戊醇混合液，剧烈振荡5分钟左右，用转速为3000r/min的离心机离心15分钟，得三层：上层为含有DNA和DNA核蛋白的水层，下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层，变性蛋白质介于两层之间。6.吸出上面的水层，再用氯仿-异戊醇如前进行脱蛋白，直至界面处不再出现变性蛋白质为止。7.后吸出上清液并将其注入两倍体积的95%乙醇中，用玻璃棒搅起白色纤维状DNA沉淀，沥干，用80%乙醇洗涤，后用少量无水乙醇洗涤。尽量沥干乙醇后，铺开在表面皿上。置于真空干燥器内干燥，即得白色纤维DNA钠盐。DNA在生物体内是以与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核酸蛋白复合物（DNP）后，必须将其中的蛋白质除去。应用用于药物与DNA相互作用的光谱学研究；用于聚合酶分析实验及其它分子生物学实验。度1.256±0.06g/cm3(Predicted)储存条件2-8°C酸度系数(pKa)15.65±0.40(Predicted)