基本描述
产品名称：微球菌核酸酶（MNase）
规格或纯度：生物活性,重组,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,≥95%(SDS-PAGE),expressed in E.coli;2000 gel units/μl
产品介绍：
本公司生产的微球菌核酸酶（Micrococcal Nuclease, MNase, EC 3.1.31.1, CAS 9013-53-0）是一种源自金黄色葡萄球菌的 Ca²⁺依赖型核酸内切酶，分子量约 18.6 kDa，最适 pH 7-10。该酶可切割单链、双链、线状、环状 DNA 或 RNA，产生 3′- 磷酸末端的单核苷酸和寡核苷酸；对单链核酸的切割效率更高，且在 A/T/U 5′侧的切割效率约为 G/C 的 30 倍，表现出 “相对” 非特异性。MNase 仅攻击核小体连接区 DNA，而核小体 DNA 受组蛋白保护，因此成为染色质结构研究的重要工具。在染色质免疫沉淀（ChIP）实验中，MNase 可在交联（X-ChIP）或非交联（N-ChIP）条件下，将染色质精准酶切为 200 bp 或 1-5 个核小体大小的片段，既保留蛋白 - DNA 相互作用，又避免超声破碎带来的随机损伤，广泛应用于转录因子定位、组蛋白修饰及表观遗传调控研究。此外，MNase 也可用于去除细胞裂解液中的核酸，降低裂解液黏度，提升下游实验效率。
| 来源 (Source) | 大肠杆菌重组表达 |
|---|
| 分子量 (Molecular Weight) | 18.6 kDa |
| 外观 (Appearance) | 无菌液体 |
| 保存液 (Storage Buffer) | 5 mM Tris (pH 7.4), 50 mM NaCl, 1 mM EDTA, 50% Glycerol。本产品同时提供 100× BSA 用于 MNase 的稀释。 |
| 酶浓度 (Enzyme Concentration) | 2000 gel units/μl |
| 纯度 (Purity) | ≥95% |
| 活性定义 (Activity Definition) | One Agarose Gel Unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1 μg of Lambda DNA at 37℃ for 15 minutes, resulting in the accumulation of low molecular weight DNA fragments of ＜400 bp as determined by agarose gel electrophoresis. Another activity unit is Kunitz Unit. One Kunitz Unit is defined as the amount of enzyme required to release acid-soluble oligonucleotides that produce an absorbance increase of 1.0 OD at 260 nm at 37℃ for 30 minutes. 1000 Agarose Gel Units is approximately equal to 100 Kunitz Units. |
组分和说明
M1518341
| Component | 320KU
| 5×320KU
| Storage |
| M1518341A | MNase (2000 gel units/μl)
| 160μl
| 5×160μl
| -20℃. Avoid freeze/ Thaw cycle. |
| M1518341B | Reaction Buffer (10×) | 1.6ml | 5×1.6ml
| -20℃. Avoid freeze/ Thaw cycle. |
| M1518341C | BSA (100×) | 250μl | 5×250μl
| -20℃. Avoid freeze/ Thaw cycle. |
产品应用
降解蛋白制剂中的核酸、体外翻译、在非机械法细胞裂解制备中降低细胞裂解物的黏度、染色质结构分析、快速 RNA 测序。
产品优势
MNase 用于染色质免疫沉淀实验时，具有样品完整性好、酶切条件温和等优势，也常应用于染色质免疫沉淀实验中的染色质片段化步骤。
使用说明
1. MNase 的稀释。如需对 MNase 进行稀释，为保证酶的稳定性并降低其被容器的吸附，建议使用添加了 1× BSA 的 1× Reaction Buffer 作为稀释液进行梯度稀释。示例：取 5 μl MNase（2000 gel units/μl）加入 45 μl 稀释液中，充分吹打混匀，即得 50 μl 200 gel units/μl 的 MNase；再取 5 μl 该浓度 MNase（200 gel units/μl）加入 45 μl 稀释液中，充分吹打混匀，即得 50 μl 20 gel units/μl 的 MNase；依此进行梯度稀释。
2. MNase 用于核酸或细胞样品的消化。
a. 按下表加入相应试剂和样品。
| Reagent | Volume (20 μl system) | Volume (50 μl system) | Final Concentration |
|---|
| Reaction Buffer (10×) | 2 μl | 5 μl | 1× |
| MNase* | 1 μl | 2.5 μl | 1~2000 gel units |
| BSA (100×)* | 0.2 μl | 0.5 μl | 1× |
| Sample | x μl | x μl | - |
| Water | (17-x) μl | (42-x) μl | - |
| Total Volume | 20 μl | 50 μl | - |
注 1：MNase 可参考步骤 1 进行适当稀释，具体稀释倍数及使用量需通过预实验摸索。
注 2：若样品中不含蛋白质，需将 BSA 以 1× 终浓度加入反应缓冲液；若为细胞样品，则无需添加 BSA。
b. 将反应体系轻轻混匀，37℃孵育 15-30 分钟（或更长时间），直至核酸被完全消化或达到预期的消化效果。
c. 选做步骤：加入适量 0.5 M EDTA (pH 8.0) 终止反应，如 20 μl 反应体系加入 1 μl 0.5 M EDTA (pH 8.0)，50 μl 反应体系加入 2.5 μl 0.5 M EDTA (pH 8.0)。
3. MNase 用于 ChIP 实验中的染色质片段化。具体实验方法请参考相关产品的文献资料。
注意事项
1. 本产品含 50% 甘油，-20℃保存时不会冻结；严禁于 - 80℃保存，冻融会降低酶活性。
2. 本产品黏度较高，吸取时需保证取样量准确；加样后充分吹打混匀，避免产生气泡。
3. Ca²⁺是 MNase 的关键催化辅助因子，反应缓冲液中需含有 1-5 mM Ca²⁺以保证酶的催化活性；反应体系中若存在 EDTA、EGTA 等金属离子螯合剂，会抑制酶活性。
4. 反应体系中的盐离子浓度需低于 100 mM，过高的盐浓度会影响 MNase 的酶活性。
5. 若样品中不含蛋白质，需将 BSA 以 1× 终浓度加入反应缓冲液。
6. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品、药品生产，不得在普通住宅内存放。
7. 为保障您的安全与健康，操作时请穿戴实验服并佩戴一次性手套。
生物活性：2000 gel units/μl
Accession #：P00644
预测分子量：18.6 kDa
级别：生物活性, 重组, ActiBioPure™, 高性能, EnzymoPure™
产品规格参数
储存缓冲液：5mM Tris, 50mM NaCl, 1mM EDTA, 50% Glycerol, pH7.4.
浓度：expressed in E.coli;2000 gel units/μl
储存温度：-20°C储存,避免反复冻融
运输条件：超低温运输
稳定性与储存：长期储存-20℃（24个月）；收货后建议分装，避免反复冻融。
CAS编号和信息：9013-53-0
酶学委员会编号：EC 3.1.31.1
单位定义：One Agarose Gel Unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1µg of Lambda DNA in 15 minutes at 37 ℃, to the extent that the accumulation of low molecular DNA fragments is <400 base pairs as determined by agarose gel electrophoresis. Another
功能和特点
Accession #：P00644
生物活性：2000 gel units/μl
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