aladdin 阿拉丁 E104208 伊文思蓝 314-13-6 BS

中文名：伊文思蓝染色液 (1%)

英文名：Evans Blue Staining Solution (1%)

纯度：BioReagent，生物染色剂，用于显微镜，1%，细胞分析，细胞染色，Live/Dead Cell Assay

货号：E1507838

Cas号：314-13-6

存储温度：2-8°C储存,避光

运输条件：低温运输

稳定性存储：Store at 2-8℃ long term (12 months). Store in the dark.

产品介绍：

  储存缓冲液： 磷酸盐溶液

  伊文思蓝 (Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式C₃₄H₂₄N₆Na₄O₁₄S₄，分子量为960.81，CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小与血浆白蛋白相近，而且在血液中与血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障 (BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量，也可作动脉插管的定位。正常情况下血浆白蛋白无法透过血脑屏障，所以染色后如果神经系统血脑屏障完整，与血浆白蛋白结合的伊文思蓝无法使其着色，相反如果神经系统血脑屏障被破坏，伊文思蓝就可以进入神经系统并使其着色，在荧光波长470nm、540nm处有强峰，680 nm处有弱峰，可以使用化学透析法和比色法进行检测。

  伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活；活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色，伊文思蓝染色后通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为最常用的浓度；活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。伊文思蓝染色液 (1%)主要由伊文思蓝、磷酸盐溶液等组成。该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、注射器、组织匀浆器

2、PBS、三氯乙酸或丙酮

操作步骤(仅供参考)：

使用前，将Evans Blue Staining Solution (1%)用PBS稀释成Evans Blue Staining Solution (0.5%)(M1507837)。

(一)血脑屏障通透性

1、取处理后的实验动物(以小鼠为例)，经尾静脉或股静脉按照 2-3ml/kg的比例注射Evans Blue Stain (0.5%)数秒至1分钟内，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色，0.5-1h后处死小鼠，取目的脑组织。

2、脑组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS，迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,1000g离心15min。

3、取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18-24h；该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清：丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。

4、1000g离心20-30 min或2000g离心15min。

5、取上述溶液1-2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值 (OD值)，同时测定已知不同梯度的标准伊文思蓝的OD值，绘制标准曲线，根据标准曲线计算出待测待测样品的伊文思蓝含量。

(二)活细胞染色

1、取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，入100μl Evans Blue Staining Solution (0.5%)(M1507837)轻轻混匀，染色3min (染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。

2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。计算公式如下：

细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

(三)种子染色

1、用刀片做横切和沿种胚中央准确纵切，加入染色液染色3-5min。

2、蒸馏水中浸泡20-60min，视脱色程度而定。

注意事项：

1、 Evans Blue Staining Solution (1%) 对人体有轻微毒性，请小心防护。

2、细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3、血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Staining Solution (0.5%)(M1507837)注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4、最好采用低温冷冻离心机进行离心。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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