人多能干细胞消化液

一、产品基本信息

二、产品简介

人多能干细胞消化液是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^®）自主研发的一款不含蛋白消化酶、专业应用于人多能干细胞消化传代的产品。本产品为温和高效型消化液，限度减少对干细胞消化损伤，传代存活率高，且消化时间 3-5min 即可，和传统细胞传代方法相比，简化细胞传代过程。本产品生产过程遵循 ISO9001 体系,并符合 GMP 指导原则。

三、产品特性

l 温和高效，传代存活率高。

l 简化细胞传代过程，省去挑克隆的操作。

四、相关产品

人 多 能 干 细 胞 培 养 基 （Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001000） Advance 人多能干细胞培养基（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001001） 人多能干细胞分化培养基（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001002）

即 用 型 基 质 胶 （Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001007） ES/iPS 细胞冻存液（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001012）

五、操作方法（此次操作以 6 孔板为例）

1) 清洗：准备预传代细胞，贴边缓慢加入预热 2 mL PBS 缓冲液并轻轻晃动，然后沿培养皿边缘吸去 PBS 缓冲液。

2) 消化：在 6 孔板中加入 2 mL 消化液使之覆盖皿底，并置于 CO2 培养箱中孵育 2~5 min；

注意：细胞密度不同，消化时间略有调整，在显微镜下观察到大部分克隆边缘以及克隆内部细胞间出

现间隙，即刻吸掉消化液停止消化。

3) 吹打：吸掉人多能干细胞消化液后，立刻加入平衡好的 2mL 干细胞培养基，用移液枪呈扇形吹打 6 孔板底，吹吸次数保持在 3~5 次，使皿底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢吹吸混匀，制成干细胞悬液，并将其转移到 15mL 离心管中；

注意：吹打细胞要轻柔，吹打次数在 3~5 次为宜，尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落，属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落，需延长消化时间。

4) 干细胞消化后，可以继续进行传代接种，也可以将干细胞进行冻存，步骤如下：

接种：1200 rpm/min 离心 3 min，弃上清，用室温平衡好的干细胞培养基缓吹打重悬细胞 5-10 次， 并转移至包被好的培养板中，每孔 2ml 培养基。接种后显微镜下观察干细胞密度以及细胞团块大小， 一般 4 个细胞以上的团块较合格，水平十字轻轻晃动 6 孔板，使细胞分布均匀。并置于 CO2 恒温培养箱培养，第 2 天观察细胞贴壁情况，每 24h 换液一次。

冻存：1200 rpm/min 离心 3 min，弃上清，加入 2mL ES/iPS 细胞冻存液（AC-1001012），重悬3~5 次后，将其加入到 2mL 冻存管中（注意：冻存液即用即拿，及时放回 4℃冰箱。）。在冻存管上标记冻存细胞种类、时间、操作者及细胞批次，冻存管置于-80℃冰箱过夜，24h 后将其转至于液氮中进行长期保存。

六、质量控制