人间充质干细胞成软骨分化试剂盒

一、产品基本信息

二、产品简介

人间充质干细胞成软骨分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^®）自主研发的一款用于人类间充质干细胞分化成软骨产品，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成软骨分化。

三、产品特性

l 诱导分化程序简单便捷。

l 诱导成软骨细胞效率高。

四、产品内容

五、操作方法

1. 相关材料

• Xeno-Free 人间充质干细胞培养基（Applied Cell^®:AC-1001003）

• 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒（Applied Cell^®:AC-1001028）

• 成软骨检测染液（Applied Cell^®:AC-1001023）

• 细胞消化液（Applied Cell^®:AC-1001024）

• 磷酸盐缓冲液(1×) （Applied Cell^®: Cat.AC-1001037）

2. 实验准备

人间充质干细胞成软骨分化培养基的配制：

2.1. 在 2-8℃解冻人间充质干细胞成软骨分化添加剂，轻晃摇匀；

2.2. 将添加剂加入到人间充质干细胞成软骨分化基础培养基中（添加剂 10mL 与 90mL 基础培养基彻底混合）混匀，即为人类间充质干细胞成软骨分化培养基。人间充质干细胞成软骨分化培养基可    在 2-8℃稳定储存 2-3 周。

注意：人间充质干细胞成软骨分化添加剂只能在 2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管 1-2 次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

3. 实验操作

3.1. 诱导成软骨球

3.1.1. 诱导成软骨分化实验之前，用细胞消化液消化后计数；

3.1.2. 分配 0.5 mL 细胞悬液（2-3×105 个细胞）到 15mL 或 50mL 离心管中，300×g，离心 5min；

3.1.3. 吸掉上清，用 2-5mL 人间充质干细胞成软骨分化培养基重悬沉淀。

3.1.4. 离心后拧松离心管盖便于气体交换，置于 37℃，5%CO2 培养箱中培养，第 2 天，细胞团应在离心管底部呈球形的团状；

注意：离心后不需要吸掉上清液，且不要随意晃动离心管。

3.1.5. 自接种时间开始计算，每天更换人间充质干细胞成软骨分化培养基；

注意：每次换液时，轻轻的摇动离心管或轻弹离心管底部确保细胞球没有粘附到管壁上。第 4-5 天即会看到非常明显软骨球。

3.1.6. 15-21 天，软骨球停止生长，收获软骨球：吸掉人间充质干细胞成软骨分化培养基，用

PBS 洗 1 次。

3.2. 成软骨检测染液染色

3.2.1. 清洗：软骨球用 PBS 清洗 2 次；

3.2.2. 固定：加 2mL 细胞固定液，固定 30min，水洗 2 次；

3.2.3. 染色：成软骨检测染液（AC-1001023）染色 5min；

3.2.4. 洗涤：dH2O 洗去多余的染料，软骨球呈深蓝色。切片染色：

3.2.5. 复水：将诱导分化的软骨球切片浸泡在 100% (vol/vol) 乙醇中 2×5 min， 95% (vol/vol) 乙醇中 1×2min，70% (vol/vol)乙醇中 1×2 min；

3.2.6. 用流动的水冲洗 30s；

3.2.7. 成软骨染料染色 5min；

3.1.1. 用 dH2O 洗去多余的染料；

3.1.2. 脱水：浸泡在 95% (vol/vol) 乙醇中 2×5min，在 100% (vol/vol) 乙醇中 2×5min;

3.1.3. 用二甲苯清洗 3×2 min；

3.1.4. 用中性树胶封片，用显微镜观察并拍照。

4. 诱导成软骨效果图