人间充质干细胞成骨分化试剂盒

hMSC Osteogenesis Differentiation Kit

人间充质干细胞成骨分化试剂盒

一、产品基本信息

二、产品简介

人间充质干细胞成骨分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^®）自主研发的一款用于人间充质干细胞诱导成骨分化的产品，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成骨分化。

三、产品特性

l 诱导分化程序简单便捷。

l 诱导成骨细胞效率高。

四、产品内容

五、相关材料

• Xeno-Free 人间充质干细胞培养基（Applied Cell^®:AC-1001003）

• 人间充质干细胞成骨分化试剂盒（Applied Cell^®:AC-1001027）

• 成骨检测染液（Applied Cell^®:AC-1001021）

• 细胞消化液（Applied Cell^®:AC-1001024）

• 磷酸盐缓冲液(1×) （Applied Cell^®: Cat.AC-1001037）

五、实验准备

人间充质干细胞成骨分化培养基配制：

1. 2-8℃解冻人间充质干细胞成骨分化添加剂，轻晃摇匀；

2. 随后将添加剂加入到人间充质干细胞成骨分化基础培养基中（添加剂 10mL 与 90mL 基础培养基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成骨分化培养基。人间充质干细胞成骨分化培养基可在 2-8℃稳定储存 2-3 周。

注意：人间充质干细胞成骨分化添加剂只能在 2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管 1-2 次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

六、实验操作

1. 诱导成骨（以 6 孔板为例）

1.1. 使用细胞细胞包被液包被细胞培养板，将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到 6 孔板上，密度为 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2×105 -3×105 cells/孔，置于 37℃，5% CO2 培养箱中培养，当细胞汇合度达到 80%-90%时，小心的将孔内人间充质干细胞培养基吸掉，向 6 孔板中加入 2 mL 人间充质干细胞成骨分化培养基,以此记为第 0 天；

注意：成骨分化容易使细胞卷起，，成骨分化时应使用包被液包被细胞培养板。

1.2. 每隔 1-2 天更换新鲜的人间充质干细胞成骨分化培养基；

注意：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每天一次半量换液。

1.3. 诱导 14-21 天期间，视细胞的形态变化及生长情况（如图 1 所示），可用成骨检测染液（Applied Cell:AC-1001021）进行染色。

人间充质干细胞在诱导成骨分化 2 天(A)、6 天（B）、14 天(C)的细胞照片，可以观察到成片的钙结节（100×）

2. 成骨检测染液染色

2.1. 诱导成骨分化结束后，吸掉 6 孔板中的成骨分化培养基，用 PBS 冲洗 1-2 次。每孔加入 1 mL 细胞固定液，固定 10~30 min；

2.2. 吸掉细胞固定液，PBS 冲洗 2 次。每孔加入 2 mL 成骨检测染液，染色 3-5 min；

2.3. 吸掉成骨检测染液，用 PBS 冲洗 2-3 次；

2.4. 将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果（如图 2 所示）。

人间充质干细胞在诱导成骨后成骨检测染液染色前（D）和染色后(E)的照片（200×）