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iFluor 350标记鬼笔环肽

iFluor 350 phalloidin
1850 300T 起订
上海 更新日期:2024-08-15

上海复申生物科技有限公司

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产品详情:

中文名称:
iFluor 350标记鬼笔环肽
英文名称:
iFluor 350 phalloidin
品牌:
FUSHENBIO
产地:
上海
保存条件:
-20℃
产品类别:
细胞生物学产品 细胞功能分析
货号:
FS1381
用途范围:
本品为iFluor 350标记的鬼笔环肽,可发出高亮度、稳定的一种亮红色荧光染料,染色反应特异性强,对比性高,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中适合用作F-actin的定性和定量检测。
规格:
300T

产品简介

鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

本品为iFluor 350标记的鬼笔环肽,可发出高亮度、稳定的一种亮红色荧光染料,染色反应特异性强,对比性高,适合用作F-actin的定性和定量检测。与Actin抗体比较,iFluor 350鬼笔环肽具有如下优点:1)与actin亚单位一比一结合,并且不与G-actin结合,具有比Actin抗体更好的染色效果;2)且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛;3)鬼笔环肽标记的非特异性信号可忽略,因而图像的反差较好;4)染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容,包括荧光蛋白、Qdot 纳米晶体和其他iFluor偶联物(包含iFluor偶联二抗);5)经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。

操作步骤

1.母液及工作液配制 

液准备:对于iFluor 350标记鬼笔环肽。本品以冻干粉形式提供,冰箱取出后先进行回温,300T规格加入300ul1×PBS缓冲液,即可得到300ul存储母液,建议根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。4℃避光保存,3个月稳定。

工作液准备:开始实验前,使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:1:401:200。工作液现配现用。按照1200比例来计算,即1ul体积的iFluor 350标记鬼笔环肽溶液中加入200ul1×PBS缓冲液浓度,可进行300次细胞染色。【注】:稀释比可根据实际实验效果适当调整。

2.  染色步骤

1:细胞爬片生长24h,使其密度达到50%汇合度。

2:吸掉培养液,37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗细胞2次。

3:使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10min。 【注意】:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4:室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

5:室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。

6:室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

7:取200µl配制好的iFluor 350标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min(通常情况下,4℃~37℃孵育皆可)。 注意:为了降低背景,可于iFluor 350标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

8:用PBS清洗盖玻片3次,每次5min。

9:使用200µl DAPI溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约30s。

10: 用PBS清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂,然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存,通常6个月内可继续做F-actin染色分析。

11: 荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择iFluor 350激发/发射滤片(Ex/Em=347/448 nm)和DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。

注意事项

1)鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg)。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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鬼笔环肽;Phalloidin;丝状肌动蛋白F-actin;细胞骨架染色;荧光标记鬼笔环肽;

公司简介

复申生物公司服务全国各地的科研院所、高等院校、卫生检验检疫部门、环境保护部门、制药、食品、化工等生产企业终端零售和全国各地经销批发的。建立了贸易往来的品牌有等等各大世界知名品牌并且成为多数生命科学产品品牌的中国代理商,产品涉及分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗等领域。

成立日期 (14年)
注册资本 100万人民币
员工人数 1-10人
年营业额 ¥ 500万-1000万
经营模式 贸易,试剂,定制
主营行业 中间体,生物化工,表面活性剂,化学试剂,医药原料

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