质粒大量制备试剂盒

货号：QR1016                 规格：5 次/ 10次

保存：常温保存，复检期1年。(注:RNaseA以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存)

试剂盒内容：

产品说明：

本试剂盒采用异丙醇沉淀法提取质粒DNA，简单易行，只需要常规离心机和几种简单的试剂，操作步骤较少。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤（仅供参考）：

1、取100-500 mL细菌培养物转入500 mL离心管中，4000 rpm离心10 min，尽量吸除上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 10 mL 溶液Ⅰ，使用旋涡振荡器或其他方法彻底悬浮细菌细胞沉淀，悬浮沉淀需均匀，不应留有小的菌块。注意:如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入10 mL溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入15 mL溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮沉淀。

5、将上述液体在 -20 ℃放置30 min，4000 rpm离心20 min。

6、分别吸取上清液至新的离心管中，按1：100比例加入Rnase A，37 ℃孵育 39 min。

7、向离心管中加入等体积的异丙醇， -20 ℃沉淀60 min，4000 rpm离心20 min，弃上清。

8、加入70 ％乙醇1 mL洗涤，4000 rpm 离心10 min，弃废液。

9、室温烘干质粒，加入1 mL经65℃水浴加热的洗脱液 TE，室温放置2 min，溶解质粒。

10、电泳检测质粒纯度，或者紫外分光光度计检测浓度。

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