HRP 膜发光底物 AE

HRP Blotting Atto ECL 为超灵敏的增强型化学发光底物，可用于高阿克级蛋白检测。与 其他市售底物相比，可提供极高水平的灵敏度和极佳的信噪比。本产品用于在 Western Blot 中针对非常低丰度蛋白获得卓越灵敏度和信噪比。 

目录号 Art no: ECMA-0100/ 0500/ 1000 

包装规格 Package size: 100mL/ 500mL/ 1000 mL 

试剂组分 Components: 

试剂 A: Art no: ECMA-A, 增强型鲁米诺溶液 (Enhanced Luminol Solution) 

试剂 B: Art no: ECMA-B, 稳定过氧化物溶液 (Stabilized Peroxide Solution) 

保质期 Shelf life: 3 years 

储 存 Storage: 2-8℃ 

应 用 Application: 

Western Blot 按 1：1 预混后使用。 产品特点 Characteristics: 

① 灵敏度高：低飞克级至高阿克级

② 稳定性好：在 4°C 下，工作溶液达 48 小时 

③ 兼容性好：硝酸纤维素膜和 PVDF 膜 

④ 信号持续长：达六小时 

⑤ 一抗稀释浓度：1:1000~1:5000 (质量浓度：0.2~1.0 µg/mL) 

⑥ 二抗稀释浓度：1:100000~1:250000 (质量浓度：4~10 ng/mL) 

用法说明 Instruction: 

使用底物进行 Western Blot 检测： 

1.清洗膜 蛋白质转移后，将印迹膜转印装置中取出，用去离子水洗涤膜 5 分钟，去除转移缓冲液。

2. 封闭膜 用 DuraBlotTM Western Blot 封闭液 (如 1×酪蛋白封闭液、1×无蛋白封闭液)在室温下摇 晃封闭 30-60 分钟。或者，在 2~8℃下静止封闭过夜。 

3. 孵育一抗 用一抗稀释液（或封闭液）稀释一抗浓度至 0.2-1μg/mL（或按照厂家推荐的稀释度）， 在膜上摇动孵育 1 小时，或将印迹在 2-8℃下孵育过夜。 

4. 洗涤膜 用洗涤液 TBST、PBST 或其他含有 0.05% Tween 20 的缓冲液清洗膜 10 分钟，重复洗 涤 2 次。 

5. 孵育酶标二抗 用酶标二抗稀释液稀释酶标二抗浓度至 4-10ng/mL 或 1:100000-1:250000（1mg/mL），在 室温下摇动孵育印迹 30 分钟至 1 小时。 

6. 清洗膜 用洗涤液清洗膜 6 次，每次 5 分钟，以彻底去除任何未结合的酶标抗体。 

7. 准备底物通过混合等量的底物 A 和稳定的过氧化物 B 成分来制备底物工作液(如将 5 毫升增强型 鲁米诺溶液与 5 毫升稳定过氧化物溶液混合)。使用足够体积的底物以确保印迹膜被底物完 全润湿，并且印迹不会变干(0.1 mL/cm2 )。

8. 底物孵育 将膜与底物工作液孵育反应 5 分钟。 

9. 膜成像 

① 从工作溶液中取出印迹，并将其置于塑料保护套或透明塑料膜中；

② 用无尘吸水纸除去多余的液体，并小心地压出印迹膜上的气泡； 

③ 使用成像系统对印迹进行成像。 注意：本产品用于检测非常敏感，必须非常仔细的优化单个分析成分(抗体，偶联物等)，以 尽量减少非特异性反应导致本底过高。