培菲替尼是一种可口服的 JAK 抑制剂

描述：Peficitinib 是一种可口服的 JAK 抑制剂，对 JAK1，JAK2，JAK3 和 Tyk2 的 IC50 值分别为 3.9，5.0，0.7 和 4.8 nM。

相关类别：研究领域 >> 炎症/免疫

靶点：

JAK3:0.7 nM (IC50)

JAK1:3.9 nM (IC50)

Tyk2:4.8 nM (IC50)

JAK2:5 nM (IC50)

体外研究：Peficitinib是一种口服JAK抑制剂，JAK1，JAK2，JAK3和Tyk2的IC50分别为3.9,5.0,0.7和4.8 nM。 Peficitinib抑制IL-2诱导的T细胞增殖，IC50为10 nM。 Peficitinib还抑制大鼠和人全血中IL-2诱导的STAT5磷酸化，平均IC50分别为124 nM和127 nM。

体内研究：在佐剂诱导的关节炎（AIA）的大鼠模型中，Peficitinib（20mg / kg，po）抑制IL-2诱导的STAT5磷酸化达78％。 Peficitinib有效抑制爪体积增加（≥1mg/ kg），ED50为2.7 mg / kg，显着降低骨质破坏评分（≥10mg/ kg），几乎完全改善了足肿胀和骨质破坏评分（30毫克/千克）。

激酶实验：使用链霉抗生物素蛋白包被的96孔板进行人JAK1，JAK2，JAK3，TYK2-结构域测定。反应混合物含有15mM Tris-HCl（pH7.5），0.01％吐温20,2mM二硫苏糖醇，10mM MgCl2,250nM生物素-Lon-底物-2（对于JAK1,2和3）或生物素-IRS1-底物（对于TYK2）和ATP（终浓度为200μM[JAK1]，10μM[JAK2]，8μM[JAK3]和4μM[TYK2]）。将培立替尼或托法替尼溶于DMSO中。通过添加激酶结构域引发反应，然后在室温下孵育1小时。使用磷酸酪氨酸特异性ELISA，使用HRP缀合的抗磷酸酪氨酸抗体（HRP-PY-20）测量激酶活性，作为生物素-Len-Substrate-2或生物素-IRS-底物的磷酸化速率。 Peficitinib的TYK2激酶测定在ATP浓度为10μM时进行。

细胞实验：将来自雄性Lewis大鼠的脾细胞悬浮于补充有10％胎牛血清和50μM2-巯基乙醇的RPMI1640中，密度为1.5×10 6个细胞/ mL。将大鼠脾细胞与伴刀豆球蛋白A在37℃下培养24小时以诱导IL-2受体表达。然后将脾细胞与指定浓度的IL-2和Peficitinib或托法替尼一起在96孔组织培养板中孵育。孵育3天后，将alamarBlue®加入每个测试孔中，然后孵育4-6小时。在545nm的激发波长和590nm的发射波长下测量荧光强度。所有实验一式三份进行，并且实验分别进行四次或一次用于使用培立替尼或托法替尼的测定。对于每个个体，为细胞制备用细胞和培养基单独培养的孔，并且为对照制备不含JAK抑制剂的IL-2刺激细胞。为了计算JAK抑制剂的抑制百分比，空白和对照分别被指定为100％和0％抑制。

动物实验：大鼠[1]将7周龄雌性Lewis大鼠用于佐剂诱导的关节炎（AIA）模型。测量每只大鼠的体重和左后爪体积（MK-101PR体积计），并且该值用于将动物分配到六组中的一组（n = 10）。通过将液体石蜡中的结核分枝杆菌H37RA菌株（0.5mg /大鼠）悬浮液注入右后足垫，在第0天在这些组中的5个中诱导关节炎。其余组未注射佐剂（正常组，n = 10）。对于口服给药方案，注射佐剂的组中的四个每天一次接受溶解在0.5％甲基纤维素（MC）中的Peficitinib（1,3,10和30mg / kg）。正常组和对照组的大鼠仅接受0.5％的MC。