重组蛋白原核表达服务-艾普蒂生物

蛋白需求不同，那么表达宿主体系也不尽相同。原核表达体系常用的宿主为大肠杆菌和枯草杆菌，前者表达量高，后期产品需要去除内毒素；后者蛋白产量相对较低，但不产生内毒素。重组蛋白大肠杆菌表达常采用BL21（DE3）和K-12衍生菌株作为表达宿主与枯草杆菌作为表达菌株的主要区别如下所示：

表达质粒体系选择

目前常用的重组蛋白表达质粒载体融合了复制子(Replicon)、启动子(promoter)、筛选标签(selection marker)、多克隆位点（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy)，如图所示：

艾普蒂生物的科学家通过改造pET载体，获得双表达质粒（BiPlasmid vector），该质粒含有双MCS位点，双T7启动子，双lac操纵子和双核糖体结合位点，利用该质粒我们可以为客户进行一次转染操作，而获得两种蛋白的独立表达。同时我们构建了含有低温诱导蛋白表达元件的pCold系列载体，该载体能够在16℃条件下经过IPTG诱导表达大分子量蛋白，如上清表达150kDa活性蛋白。

融合标签选择

亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析，艾普蒂生物总结了常用的一些蛋白标签性质，如表1所示。

蛋白重组表达策略组合

重组蛋白的表达往往不像理论那样一帆风顺，在实际的表达过程中有可能产生各种各样的问题。在选择一个蛋白表达策略困难的情况下，那么采用看似笨拙的方法，有可能会成为一种意想不到的“成功捷径”，比如项目要求构建表达两种重组蛋白时，构建6种不同的表达质粒，意味着有36种不同的表达条件组合，通过高通量微量蛋白表达实验一次性就可获得蛋白表达条件组合，后续中式飞行试验和成本控制会变得相对容易。

蛋白原核重组表达服务具体流程

我们的服务优势

--密码子优化：包含稀有密码子分析，蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

--多种融合标签载体和宿主，以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

--多种规模蛋白发酵模式：小规模（1L，10L和30L）、大规模（80L，130L，250L和500L发酵罐）

--短时间内制备高纯度毫克级，克级重组蛋白

--低内毒素：LAL检测法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撑体系，保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯

更多技术服务：

高通量测序相关检测服务

项目名称服务

mRNA测序/转录组学测序（illumina  nova-seq）服务

mRNA测序/转录组学测序（BGI)服务

lncRNA测序（动物）-高阶版服务

lncRNA测序（动物）-普通版服务

miRNA测序服务

cirRNA测序（RNaseR酶消化）服务

全基因转录组高通量测序（（miRNA、mRNA、lncRNA））服务

16S rDNA高通量测序（含分析）服务

宏基因组学测序服务

微量细胞转录组测序（smart-seq）服务

10X单细胞测序服务

代谢组和16sRNA的关联分析服务

DNA甲基化芯片服务

lncRNA芯片检测服务

mRNA表达谱芯片服务

ceRNA芯片服务

ATAC-seq（转座酶可接近性核染色质区域测序分析）服务

CHIP-seq服务

WGBS（全基因组甲基化测序）服务

简化甲基化测序（RRBS）服务

RNA m6A甲基化测序（MeRIP Seq）服务

代谢组学相关检测服务

项目名称服务

中药非靶代谢组（LC-MS）服务

非靶代谢组（LC-MS）/液相色谱质谱联用服务

非靶代谢组（GC-TOF-MS）/气象色谱质谱非靶标服务

非靶脂质组（LC-MS）服务

7种短链脂肪酸靶标定量(SCFA)服务

22种氨基酸定性定量服务

23 种神经递质定量服务

41种胆汁酸定量服务

51种脂肪酸定量服务

5种TMAO及类似物定量服务

26种有机酸服务

35个黄酮定量服务

服务

服务

服务

蛋白质组学服务

蛋白组TMT（不含宏蛋白质组）服务

Laber free非标（不含宏蛋白质组）服务