CHO-GS重组蛋白表达服务-艾普蒂生物

CHO-K1细胞系：

亲代 CHO 细胞系的亚克隆，来自成年中国仓鼠的卵巢。由于缺乏脯氨酸合成基因，细胞需要脯氨酸，生物合成链中的障碍在于将谷氨酸转化为谷氨酰胺γ丝醛的步骤。它们会因霍乱毒素而发生形态变化。

应用：营养和基因表达研究仓鼠的 CHO-K1 细胞系已用于通过庆大霉素保护试验研究质粒 pCM01 诱导对细菌与 CHO-K1 细胞结合的影响。它还可以在有或没有乳酸的情况下培养，以测量细胞增殖的时间序列。

CHO表达的优势：

--CHO 细胞在复杂蛋白质的蛋白质折叠方面表现出色，具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子

--CHO 细胞可以在无血清细胞培养基中生长良好，消除了血清作为传染源的潜在来源，提供了更高的安全性

--既可贴壁生长，又可以悬浮培养，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力

--具有重组基因的高效扩增和表达能力，外源蛋白的整合稳定

--CHO 细胞的蛋白质产量很高——通常可以达到2 – 6 g/L

--无血清培养基中的 CHO 细胞可轻松进行下游加工

--CHO 细胞可以瞬时或稳定转染以表达蛋白质

--在单克隆抗体的情况下，中国仓鼠卵巢 (CHO) 和 NS0 (小鼠骨髓瘤) 细胞是最常用的细胞系

GS系统工作原理：

图1显示了 GS 酶如何催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺，从而使细胞能够复制。

当 CHO 细胞中的蛋白质表达系统有 GS 缺失时，研究人员用重组 DNA转染CHO 细胞，该 DNA 由与 GS 基因密切相关的目的基因组成。甲硫氨酸亚砜胺 (MSX) 选择系统用于选择产生目标蛋白质的 CHO 细胞。 MSX 是一种类似于谷氨酸的药物，可与 GS 结合，从而抑制谷氨酰胺的产生，而谷氨酰胺是细胞生长所必需的。在基因扩增过程中，CHO 细胞在高水平的 MSX 中培养。选择具有目标基因的 GS 基因拷贝数增加的 CHO 细胞。GS 水平不足的 CHO 细胞会死亡。一旦选定，来自 CHO GS 阴性宿主的转染细胞系不需要培养基中的 MSX。

图1  GS 酶催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺

艾普蒂生物根据客户不同表达系统的选择，为客户提供需要插入配套的稳转细胞系构建的表达载体，也为客户提供表达载体定制的服务。

表达系统的选择：

DHFR 系统用于 CHO 细胞，其中突变型 CHO dhfr细胞系用含有靶基因和dhfr的载体转染标记基因。选择发生在不含次黄嘌呤、甘氨酸和胸苷的培养基中。同时，由于 MTX 能够抑制 DHFR 酶，因此逐渐增加甲氨蝶呤 (MTX) 浓度以放大蛋白质产物的表达。GS 系统已用于 NS0 和 CHO细胞系，其中细胞用除 GS 基因外还含有目的基因的载体转染。拥有GS基因的细胞可以合成自己的细胞内谷氨酰胺；因此，这些细胞可以在添加谷氨酸和天冬酰胺提供的氨基团的无谷氨酰胺培养基中培养。

与 DHFR 系统相比，GS 选择系统的一个优点是细胞培养物产生的氨较少，这会对重组蛋白的糖基化产生负面影响；此外，GS 系统通常提供较短的选择周期，因为该系统需要较低的基因拷贝数来实现类似的扩增转基因表达水平。

GS-CHO系统的表达载体：

此外，瑾萱的科学家可根据客户的项目需求为您定制表达质粒，详情请与艾普蒂生物的工作人员联系。

客户提供：

服务优势：

--密码子优化：包含稀有密码子分析，蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

--多种融合标签载体和宿主，以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

--高活性表达：实现复杂的糖基化修饰和磷酸化修饰，具有完整的空间结构特征

--多重表达模式：稳定表达和瞬时表达

--低内毒素水平：LAL检测法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撑体系，保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯

更多技术服务：

高尔基染色（神经纤维染色）服务

刚果红染色服务

油红O染色服务

瑞氏染色服务

姬姆萨染色服务

瑞氏-吉姆萨复合染色服务

ALP碱性磷酸酶染色（NAP偶氮偶联法)服务

ALP酸性磷酸酶染色（ACP）(改良Gomori钙钴法)）服务

番红-固绿染色（软骨）服务

甲苯胺蓝染色/toluidine blue染色服务

普鲁士蓝染色/铁染色服务

TTC染色（梗死面积检测方法）服务

β-半乳糖苷酶染色服务

Trichrome masson goldner 染色/Goldner三色法染色/Villanueva-Goldner染色服务

ATPase染色/ATP酶钙钴法染色/腺苷三磷酸酶染色服务

基底膜六胺银染色（PASM）服务

抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色服务

纤维素染色(改良 MSB 法)服务

Van Gieson染色/VG染色/VCG染色 （纤维组织）服务

亚甲基蓝碱性品红染色服务

吖啶橙(Acridine Orange, AO)染色服务

细胞自噬MDC单独染色服务

钙黄绿素染色服务

尼罗红染色（动物）服务

免疫组化染色累积光密度值（IOD）分析服务

免疫组化染色平均光密度值（MOD）分析服务

电镜-超微病理分析服务

电镜-测量分析服务

电镜-统计分析服务

微血管定量计数微血管密度（MVD）分析费服务

HE病理分析--病理描述类服务

HE病理分析--病理评分类服务

HE病理分析--病理描述+评分类服务

病理形态测量分析服务

胶原纤维面积百分比服务

芯片组化扫描结果分析服务

免疫荧光阳性结果分析服务

细胞相关检测服务

项目名称服务

细胞复苏服务

细胞培养/代养细胞（一类培养基）服务

裸鼠成瘤细胞培养费用服务

细胞增殖：MTT/CCK8检测（96T）服务

凋亡检测服务

AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒服务

AnnexinV-PE/7 AAD凋亡检测试剂盒（细胞转染带绿色荧光用此试剂盒）服务

流式细胞周期检测服务

PI/Rnase Staining Buffer Solution服务

流式表面抗原鉴定上机（单标）服务

流式表面抗原鉴定单标/流式单标检测服务

流式表面抗原鉴定双标/流式双标检测服务

流式表面抗原鉴定三标/流式三标检测服务

流式表面抗原鉴定四标/流式四标检测服务

流式检测细胞吞噬FITC-dextran服务

外周血淋巴细胞分离（2ml血液算1个样本）服务

大鼠/小鼠脾脏淋巴细胞分离服务

外周血血小板分离（2ml血液算1个样本）服务

外周血单核细胞PBMC分离费用服务

组织单细胞悬液制备费用服务

流式分选服务

细胞刺激-活化-破膜费服务

ROS活性氧检测（绿光）服务

ROS活性氧检测（红光）服务

JC-1/线粒体膜电位流式检测服务

软琼脂集落形成实验服务

平板克隆形成服务

细胞划痕服务

成管实验/体外血管生成实验服务

Transwell迁移服务

Transwell侵袭服务

细胞成球实验服务

细胞粘附实验服务

台盼蓝染色服务

细胞BrdU染色(IHC法）服务

细胞BrdU染色（ICF法）服务