农杆菌感受态制备试剂盒

碧云天生产的农杆菌感受态制备试剂盒(Agrobacterium Competent Cells Preparation Kit)，是一种专门用于农杆菌感受态快速制备的试剂盒。农杆菌经过本试剂盒处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。

农杆菌常生活在植物根表面，依靠由根组织渗透出来的营养物质生存，是一类广泛存在于土壤中的革兰氏阴性细菌，常用于基因过表达、敲除、敲减和编辑等转基因植物的构建。根瘤农杆菌Ti质粒上的T-DNA上有8个左右的基因在植物细胞内表达，指导合成一种特殊化合物冠瘿碱，引起转化细胞癌变;而发根农杆菌的Ri质粒同样含有T-DNA,可诱导产生发状根，其特征是大量增生高度分支的根系。

本试剂盒适用于绝大多数常见的农杆菌，如GV3101、EHA101、LBA4404和EHA105等根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)或C58C1和Ar.1193等发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)感受态细胞的制备。使用本试剂盒可以使感受态转化效率达到10³-10⁴cfu/μg质粒。但是不同种类农杆菌菌种制备出来的感受态细胞，转化效率可能有较大差异。此外，对于较小的质粒转化效率会略高，而对于较大的质粒则转化效率会略低一些。

本试剂盒操作简单，细菌培养后仅需1个小时左右即可完成感受态细胞的制备。

本试剂盒提供了专门用于制备农杆菌感受态的培养液，使感受态的制备更加便捷。

使用碧云天生产的农杆菌感受态制备试剂盒制备的农杆菌感受态转化效果参考图1。

图1. 使用碧云天农杆菌感受态制备试剂盒制备的农杆菌感受态转化效果图。使用本试剂盒制备的感受态在液氮中速冻后保存在-80℃。取-80℃保存的农杆菌感受态放置于室温片刻，待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰浴中。每100 μl感受态细胞加入0.1μg质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置15min、液氮1-3min、37℃水浴3-5min。 然后在超净台中加入500 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，28℃振荡培养2h。4000×g离心1min收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬农杆菌沉淀，涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28-30℃培养箱培养2-3天。GV3101转化效果见图1A(转化效率约为3×10³ CFU/μg质粒)，LBA4404转化效果见图1B(转化效率约为1.5×10³ CFU/μg质粒)，EHA101转化效果见图1C(1×10⁴ CFU/μg质粒)。本产品的实际使用效果会因具体实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本试剂盒可以分多次使用，共可以制备足够进行100次转化的感受态细胞。